[发明专利]一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法在审
| 申请号： | 201710313228.X | 申请日： | 2017-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN107142274A | 公开（公告）日： | 2017-09-08 |
| 发明（设计）人： | 汪滢;鲍大鹏;唐利华;高英女;王莹 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/12;C12N1/15 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所31233 | 代理人： | 黄志达,魏峯 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 虫草 表达 天蚕 抗菌 方法 | ||
1.一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，包括：
(1)收集PDA上蛹虫草菌丝，提取DNA；利用引物扩增得到蛹虫草HSP70基因的启动子片段，将片段构建到PDHt-bar上，得到载体PDHt-HSP；
(2)合成天蚕素抗菌肽片段，酶切，连接到上述PDHt-HSP上，得到PDHt-HSP-CAD载体；
(3)利用上述PDHt-HSP-CAD载体转化农杆菌，将蛹虫草孢子和得到的农杆菌菌株共培养，经诱导和筛选得到转基因菌株。
2.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的HSP70基因的启动子片段的序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的引物为PR1：CGGAATTCCCCCTAAATCACAAGCTTGGTCCG；
PR2：TCCCCCGGGGTTGGCGGCTTCTGTGTGTGTA。
4.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的PDHt-bar的序列如SEQ ID NO.2所示。
5.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的天蚕素抗菌肽片段的序列如SEQ ID NO.3所示。
6.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的合成天蚕素抗菌肽片段所用引物为
F：TCCCCCGGGATGGGCTTCGGCTGCAACGG；
R：CGGGATCCTTAGTAGCACTTGCAAACAAAAC。
7.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的酶切位点为SmaI/BamHI。
8.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的共培养采用含50μg/mL卡那霉素的LB固体培养基。
9.根据权利要求1所述的一种在蛹虫草中过表达天蚕素抗菌肽的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的诱导和筛选采用含300μg/mL头孢霉素和300μg/mL草铵膦的M-100培养基。
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