[发明专利]一种分子SSR标记技术

权利要求书

1.一种分子SSR标记技术，其特征在于，包括如下步骤：

A、对所需标记的分子进行基因组DNA提取，且基因组DNA提取在35-50摄氏度的密封条件下进行；

B、选取分子标记所需要的多种引物，并将多种引物放置到透明反应器中，在45-60摄氏度的条件下滴加催化剂，且边滴加边对其进行搅拌，从而分子标记所需的引物进行合成；

C、将A中处理后的基因组DNA提取置于35-50摄氏度的条件下，然后通入合成的引物，且引物在30-45s内完成，从而对片段PCR进行扩增，PCR反应分为两个阶段，首先寡核苷酸引物在低严谨条件下与模板DNA退火，此时发生了一些合成，以便稳定模板与引物之间相互作用，然后进行高严谨退火条件的循环，两个位点间那些序列在低严谨度退火条件下发生的引物延伸可继续在高严谨条件下扩增；

D、将上述处理完成的PCR扩增产物进行纯化，PCR产物加入2倍体积的乙醇中，在20-30摄氏度的条件下沉淀过夜后低速短暂离心，弃掉上清，然后用65-75％乙醇洗涤一次后，弃掉乙醇，放干后再用无菌水或者TE溶解；

E、然后将PCR扩增产物片段扫描准备；

F、PCR扩增产物上机基因扫描；

G、生物信息学分析。

2.根据权利要求1所述的分子SSR标记技术，其特征在于，在D中的低速短暂离心的速率为2500-3500转/min,且离心1-2min。

3.根据权利要求1所述的分子SSR标记技术，其特征在于，所述的透明反应器在使用前，均经过多次的消毒杀菌处理，并对其烘干后再使用。

4.根据权利要求1所述的分子SSR标记技术，其特征在于，催化剂具为异戊醇或者是乙醇中的一种或者是两种混合物。

5.根据权利要求1所述的分子SSR标记技术，其特征在于，催化剂的用量为8-12mL。

6.一种根据权利要求1所述的基因组DNA提取的方法，其特征在于，具体步骤如下：

A1、将DNA提取材料用不同浓度乙醇逐级脱水,沉淀分离，并向其中加入DNA提取缓冲液，蛋白酶K和催化剂，振荡混匀，从而形成混合溶液；

A2、将上述混合溶液系置于35-40℃的条件下反应30-45min，然后于2-6℃的环境下保存；

A3、将A2中形成的溶液进行离心，得上清，即为所需要的基因组DNA。

7.根据权利要求6所述的基因组DNA提取的方法，其特征在于，在上述中的催化剂蛋白酶、核糖核酸酶与缓冲液ATL的混合物，且蛋白酶、核糖核酸酶与缓冲液ATL的重量比为1：1：0.5。