[发明专利]定量检测污泥中含硫氨基酸的方法在审
申请号: | 201710315596.8 | 申请日: | 2017-05-08 |
公开(公告)号: | CN107238664A | 公开(公告)日: | 2017-10-10 |
发明(设计)人: | 章婷婷;何群彪;陈阳;薛勇刚;吴芳芳;朱倩倩;戴晓虎;戴翎翎;黄永西 | 申请(专利权)人: | 同济大学苏州研究院;上海城市污染控制工程研究中心有限公司;苏州同德环保科技有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02 |
代理公司: | 苏州铭浩知识产权代理事务所(普通合伙)32246 | 代理人: | 王军 |
地址: | 215101 江苏省苏州*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 定量 检测 污泥 中含硫 氨基酸 方法 | ||
1.定量测定污泥中含硫氨基酸的方法,其特征在于,按如下步骤进行:
a、将污泥样品于冷干机冷干,用球磨机对冷干样品进行研磨,而后过筛,低温保存;
b、将含半胱氨酸、蛋氨酸的污泥样品经过甲酸氧化,制备性质稳定的磺基丙氨酸和蛋氨酸砜;
c、用浓盐酸对污泥氧化液进行水解,水解液经3kD滤膜超滤,去除污泥中大分子杂质,纯化氨基酸;
d、将污泥中的氨基酸与衍生剂邻苯二甲醛进行衍生反应,生成有荧光吸收的衍生产物;
e、将衍生产物用高效液相色谱进行分析,定量检测污泥中的含硫氨基酸。
2.根据权利要求1所述的定量检测污泥中含硫氨基酸的方法,其特征在于,a步骤是取污泥40ml于50ml离心管于-20℃冷冻;将冷冻污泥置于冷干机中,在-40℃条件下冷干3天;将污泥冷干样用球磨机于4500rmp条件下粉碎10min;将粉碎后的污泥样品过200目筛,于-50℃冰箱保存。
3.根据权利要求2所述的定量检测污泥中含硫氨基酸的方法,其特征在于,b步骤是取a步骤的污泥样品0.0500g于水解管中,加入过甲酸1.5ml,于50℃条件下,水浴氧化30min;向污泥氧化液中加0.4ml偏重亚硫酸钠溶液,终止氧化反应;所述过甲酸溶液是将30%的过氧化氢溶液与88%的甲酸溶液按照体积比为1:9混合,在常温下放置1h制得,此溶液现用现配;所述偏重亚硫酸钠溶液是将33.6g偏重亚硫酸钠加水定容至100ml制得。
4.根据权利要求3所述的定量检测污泥中含硫氨基酸的方法,其特征在于,c步骤是向b步骤制得的污泥氧化液中加入5.1ml浓度为8.2mol/l的盐酸溶液;向水解管中通氮气30s,密封水解管,将水解管置于105℃烘箱中水解22h;取出水解管,置于室温冷却,开启水解管,将水解管内污泥水解液移入茄形旋转蒸发瓶中,并用1ml浓度为0.1mol/l盐酸洗出残留水解液,反复三次,将污泥水解液于40℃、-10bar条件下,旋转蒸发至干;用0.1mol/l盐酸将茄形旋转蒸发瓶中的氨基酸样品溶出,并定容至10ml;取定容后的水解液400μl于3kD超滤离心管中,于13805g离心力下离心40min制得污泥氨基酸超滤液;所述8.2mol/l盐酸溶液是将纯盐酸683ml定容至1000ml制得;所述0.1mol/l盐酸溶液是将纯盐酸8.3ml定容至1000ml制得。
5.根据权利要求4述的定量检测污泥中含硫氨基酸的方法,其特征在于,d步骤是将c步骤所得的污泥氨基酸超滤液200μl加入内插管中,依据如下程序步骤进行在线衍生:进样针吸取2.5μl且pH为10.2的硼酸缓冲盐溶液,吸取0.5μl污泥氨基酸超滤液,吸取0.5μl邻苯二甲醛衍生剂,吸取3μl空气以最大速率混合6次;吸取32μl且pH为6.5的二水合磷酸二氢钠稀释液,吸取空气18μl以最大速率混合2次,完成氨基酸衍生过程;所述pH为10.2的硼酸缓冲盐溶液,称取2.50g硼酸,加水溶解,于100ml容量瓶定容得0.4mol/l硼酸溶液,用10mol/l氢氧化钠溶液调pH至10.2;所述10mol/l氢氧化钠溶液,称取40g氢氧化钠,加水溶解,于100ml容量瓶定容制得;所述邻苯二甲醛溶液,称取80.0mg邻苯二甲醛,加7ml硼酸缓冲液溶解,再加1ml乙腈、125μl巯基丙酸混匀;所述pH为6.5的二水合磷酸二氢钠稀释液,称取2.6408g磷酸二氢钾,加水溶解,于1000ml容量瓶定容,用10mol/l氢氧化钠调pH为6.5,再加4ml磷酸。
6.根据权利要求4述的定量检测污泥中含硫氨基酸的方法,其特征在于,e步骤的色谱流动相A、流动相B、流速、洗脱梯度、激发波长Ex=340nm、发射波长Em=460nm;所述流动相A是将甲醇、乙腈、水按照体积比为45:45:10混合制得,使用前超声脱气30min;所述流动相B是称取2.6408g磷酸二氢钾,加水溶解,于1000ml容量瓶定容,用10mol/l氢氧化钠调pH为6.5制得,使用前过0.22μm滤膜过滤,超声脱气30min;所述流动相梯度如下表所示:
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