[发明专利]一种利用双功能融合酶Lip-EG1CD进行废纸脱墨的方法在审

专利信息
申请号: 201710315856.1 申请日: 2017-05-08
公开(公告)号: CN107059454A 公开(公告)日: 2017-08-18
发明(设计)人: 丁少军;刘敏;杨舒雅 申请(专利权)人: 南京林业大学
主分类号: C12N9/20 分类号: C12N9/20;C12N9/42;D21C5/00;D21C5/02;C12N15/62;C12N15/81
代理公司: 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 代理人: 邱兴天
地址: 210037 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 利用 功能 融合 lip eg1cd 进行 废纸 方法
【说明书】:

发明公开了一种利用双功能融合酶Lip‑EG1CD进行废纸脱墨的方法,包括:废纸预处理,采用双功能融合酶脱墨处理,以及收集纸浆;其中,双功能融合酶为含内切型纤维素酶和脂肪酶活性的双功能融合酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。本发明将内切型纤维素酶和脂肪酶通过linkers连接起来,构建出含内切型纤维素酶和脂肪酶活性的双功能融合酶,具有较好的热稳定性、pH耐受性,是一种工业化应用的优质酶源。可以在中性条件下同时协同发挥二种酶的脱墨作用,可以降低酶成本,提高脱墨效率,在工业化应用中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于融合酶应用技术领域,具体涉及一种利用双功能融合酶Lip-EG1CD进行废纸脱墨的方法。

背景技术

由于资源、环境和能源的问题,二次纤维(废纸)在世界范围内已经成为制浆造纸工业一种重要的纤维来源。废纸回用的关键是油墨的脱除,因此脱墨技术也成为当今国内外研究的热点。传统的化学法脱墨需要使用含氯的化合物,以及氢氧化钠,碳酸钠等化学品,会带来二次污染等环境问题。利用生物酶进行脱墨是近年来发展起来的环境友好型技术,用于废纸脱墨的生物酶有纤维素酶、半纤维素酶、脂肪酶、漆酶等,目前使用的这些微生物来源的酶为单功能的酶,即每一种酶只含有单一的催化活性,虽然它们单独使用具有一定脱墨效果,但单酶单独使用往往很难到达化学法的效果,因此常需要几种酶混合使用。但多种酶的混合使用会增加酶的数量和用量及使用成本,同时会增加脱墨技术的复杂性,导致工业化应用时经济竞争性下降,因此还不能满足使用需求。

发明内容

发明目的:针对传统化学脱墨方法存在能耗高、环境污染重、成本高;而酶法脱墨往往需要多种酶混合使用,酶使用成本高的问题,本发明的目的是提供一种利用双功能融合酶Lip-EG1CD进行废纸脱墨的方法,具有条件温和,环境污染小,脱墨效率更高,成本更低等优点。

技术方案:为了实现上述发明目的,本发明采用的技术方案为:

一种利用双功能融合酶Lip-EG1CD进行废纸脱墨的方法,在废纸脱墨中使用的酶为双功能融合酶Lip-EG1CD,所述的双功能融合酶Lip-EG1CD为含内切型纤维素酶和脂肪酶活性的双功能融合酶Lip-EG1CD,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的利用双功能融合酶Lip-EG1CD进行废纸脱墨的方法,包括以下步骤:

1)把废纸撕碎后放入5%浆浓的水桶里,常温浸泡,用ZQS 2打浆机疏解纸张,然后把纸浆用离心机甩干、分散纸浆、测浆料水分后储存于4℃条件下;

2)在反应容器中加入100mM pH 7.5磷酸钠缓冲液、水、纸浆、0.3%AEO-9、双功能融合酶,200rpm,35℃~55℃恒温震荡反应,反应结束后沸水灭活5min终止反应,取浆液用于测发色基团和还原糖释放量;

3)转移反应体系至浮选池,加入CaCl2、0.3%AEO-9和水,浮选10min,之后用自来水冲洗并用60目筛收集纸浆。

所述的双功能融合酶的编码基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的双功能融合酶的用量为4.5-6.5nmol。

一种制备所述的双功能融合酶Lip-EG1CD的方法,将内切型纤维素酶和脂肪酶通过linkers连接,获得融合基因,构建内切型纤维素酶和脂肪酶的融合基因的表达载体,并在Pichia pastoris中表达,获得双功能融合酶。

所述的制备双功能融合酶Lip-EG1CD的方法,包括以下步骤:

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