[发明专利]一种侧柏叶TLC鉴别方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种侧柏叶TLC鉴别方法。

背景技术

侧柏叶又名柏叶、丛柏叶、扁柏、云片柏等，是医家所重视的治血良药。中医认为侧柏叶味苦，性微寒，无毒，入心、肝、大肠经。具有凉血、止血、祛内湿、散肿毒之功。可治吐血、鼻出血、尿血、血痢、崩 漏、风湿痛、咳嗽、烫伤等症。根据科学研究表明，侧柏叶含大量的挥发油，油中主要成分为侧柏烯、小茴香酮等，叶中还含有钾、钠、磷、氮、钙、镁、锰和锌等多种微量元素。药理实验表明，侧柏叶煎剂能够明显的缩短出血时间及凝血时间，除此以外，还有镇咳、平喘、祛痰、镇静等作用。相关实验表明，侧柏叶对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、卡他球菌、白喉杆菌、伤寒杆菌等均有很好的抑制作用，有乌须发、止血、止咳喘的功效。

目前，对中药材的理化鉴别方法，主要包括荧光法，微量升华法，显色，沉淀、泡沫反应，钙盐、钠盐等鉴别反应，薄层色谱法（TLC）等。 其中，由于TLC法处理简单，成本低，可同时对多个成分进行一个比较，不需使用复杂仪器，应用范围最为广泛。如2015版中国药典侧柏叶项下收载了目前法定的侧柏叶TLC鉴别方法，但由于该法中采用的索氏提取步骤，至少需6小时，加热回流步骤也需要1小时，操作繁琐，操作时间长、有机试剂用量多导致成本较高等缺点，无法满足实际应用中快速、简便的需求。因此，建立一种快速、准确，高效的侧柏叶TLC鉴别方法是很有必要的。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述问题，提供一种侧柏叶TLC鉴别方法，具有专属性强、操作简单、快速、准确，高效、成本低廉、重现性好等优点，可用于对侧柏叶药材及饮片质量快速检测。

本发明技术方案如下：

一种侧柏叶TLC鉴别方法，步骤包括：

（1）取待测样品粉末 0.5～1.5g，置具塞锥形瓶中，加70％甲醇 10～30mL，超声30min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；

（2）取槲皮苷标准品，加乙醇配制为 0.05～0.15mg/mL的溶液，作为对照品溶液；

（3）薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各 2～4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为（10:1:1）～ （14:1:1）的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开，取出，晾干，喷以1wt％的三氯化铝-乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。

优选地，步骤（1）中，各原料用量为待测样品粉末1g、70％甲醇20mL。

优选地，步骤（2）中，取槲皮苷标准品，加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液。

优选地，步骤（3）中，吸取供试品溶液和对照品溶液各 3μL，展开剂乙酸乙酯-甲酸-水的体积比为12:1:1。

优选地，步骤（3）中，所述的薄层色谱法试验为2015年版中国药典四部0502薄层色谱法。

所述的侧柏叶TLC鉴别方法，供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，则待测样品为侧柏叶。

侧柏叶的止血有效成分通常认为是槲皮素和鞣质，实际上，本发明通过实验表明侧柏叶中没有槲皮素，只有槲皮苷，现有检测方法中，也都是将槲皮苷水解成槲皮素后进行鉴定。现有技术中，以药典的鉴别方法为例，是将侧柏叶叶绿素成分进行提取后，再对其所含黄酮类成分槲皮苷进行酸水解，水解成槲皮素，再用乙酸乙酯萃取，水洗，浓缩后进行鉴定。由于其样品制备过程涉及索氏提取，耗时至少6h，且以乙醚为提取液，操作具一定的危险性，黄酮类成分提取、水解共计耗时1.5h。由于侧柏叶中含有的是槲皮苷等黄酮类成分，本发明改变以往采用槲皮素为对照品的通用方法，不通过水解、索氏提取等步骤，在最优条件下，直接将槲皮苷提取出来进行鉴定，经实验验证，本发明方法操作简单，便捷，有效，且能发映出侧柏叶自身的特点，可快速准确用于对侧柏叶进行TLC鉴定。

本发明技术方案相对于现有技术有益效果为：

1、快速、简便、重现性好：①节约时间：该法较药典法省去药典中索氏提取（至少6小时）、加热回流1小时、酸水解等步骤，整体可将鉴定时间缩短90%。②节省试剂：上述步骤中的有机试剂均可节省，尤其是减少了乙醚的使用，减少操作过程的不适性和危险性。③重现性好：该法较为简单、易操作，重现性好。

2、以槲皮苷为对照更适宜于鉴别侧柏叶：因侧柏叶中含有槲皮苷不含槲皮素成分，因此更适于侧柏叶的鉴别。

3、色谱清晰，各斑点分离良好：该方法所得图谱的斑点清晰，分离良好，重现性好。