[发明专利]一种快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法，其特征在于，包括以下步骤：

一、禾谷镰刀菌孢子悬液的制备；

二、将灭菌后的小麦种室温下萌发至胚芽鞘长度为1.4～1.6cm；

三、将胚芽鞘顶端剪去2mm～4mm，取禾谷镰刀菌孢子悬液2～4μL，接种于胚芽鞘伤口处，每个基因型重复接种15～25株，重复三次；

四、在光照培养箱里培养7天，测量胚芽鞘病斑长度，以三次试验所有参试植株的平均病斑长度作为该品种的抗病性量化指标。

2.如权利要求1所述的快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法，其特征在于，所述的禾谷镰刀菌孢子悬液的浓度为1*5×10⁵个/mL。

3.如权利要求2所述的快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法，其特征在于，所述的禾谷镰刀菌孢子悬液的制备方法，包括以下步骤：

(1)禾谷镰刀菌的活化取出于-20℃保存的禾谷镰刀菌菌株，接种于PDA平板，于28℃，黑暗条件下培养3天；

(2)孢子的培养挑取活化的菌丝，接种于GGH液体培养基，于光照条件下，28℃培养5天～7天，产生分生孢子；

(3)孢子的收集用无菌纱布滤去菌丝，收集菌液于无菌三角瓶,5000r/min离心5min收集菌体，加入无菌水，用血球计数板调节孢子浓度至5×10⁵个/mL；

(4)孢子的保存将孢子分装至1.5mL离心管，在-20℃保存备用。

4.如权利要求1所述的快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法，其特征在于，所述步骤二中小麦种灭菌的方法为：先用70％乙醇冲洗1min；无菌水快速冲洗后，用0.1％质量分数的HgCl₂消毒5min～8min；无菌水冲洗3～4次，直到去除HgCl2污染。

5.如权利要求1或4所述的快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法，其特征在于，所述步骤二中小麦种室温下萌发时将小麦种子背部朝上，均匀地放置于铺有湿润滤纸的塑料盒内，于室温条件下萌发2～5天。

6.如权利要求1所述的快速鉴定小麦镰刀菌茎腐病的方法，其特征在于，所述步骤四中在26℃，16h光照，99％相对湿度的光照培养箱里培养。