[发明专利]深海鱼胶原蛋白肽水凝胶

说明书

技术领域

本发明涉及的是水凝胶技术领域，具体的说是一种深海鱼胶原白肽水凝胶。

背景技术

皮肤是人体与环境间的天然屏障和沟通桥梁，大面积暴露于外部环境的皮肤组织，可能因为烧伤、机械创伤以及慢性疾病(如糖尿病)等造成缺损或功能丧失。我国每年各类皮肤缺损患者高达数千万，皮肤缺损治疗的关键在于尽早封闭创面，减少由于感染而导致的并发症。迄今为止，自体皮移植仍然是治疗全层皮肤缺损的最有效方法。对于大面积皮肤缺损患者，自体皮移植存在供皮区不足等问题，需要经过多次移植才能最终治愈。大面积全层皮肤缺损患者的高死亡率仍然是临床上亟待解决的难题之一。组织工程和再生医学的发展使皮肤缺损的完全再生和修复成为可能。皮肤组织工程的研究内容主要包括三个方面，即皮肤种子细胞培养、真皮支架材料和体外构建活性复合皮。

组织工程皮肤的关键环节之一是构建缺失皮肤的支架结构，动物组织来源的细胞外基质大分子由于其能够提供细胞生存的空间结构、组织相容性较理想并具有细胞附着的结合点等特点，是目前组织工程皮肤支架所采用的主要材料(Clark et al.,2007)。由于从动物提取的胶原蛋白在吸收率方面有一定的局限性，并且随着对疯牛病、口蹄疫和禽流感等高致病性传染病的恐惧，这种较为传统的方式近趋淘汰。美国食品和药品管理署(FDA)已限制并逐步禁止其临床使用。且胶原蛋白可细分为：大分子胶原蛋白和小分子胶原蛋白肽。平常我们食用的猪蹄的胶质，里面含有的胶原蛋白是大分子蛋白质，其分子量在30万道尔顿以上，并不能被人体直接吸收，并且吸收率很低。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供了一种深海鱼胶原白肽水凝胶，以鱼类提取为主，通过酸碱、酶切等技术把分子量控制在6000道尔顿以内的胶原蛋白肽，具有很好的溶解度和保水能力，以及低的免疫原性和生物可降解性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种深海鱼胶原白肽水凝胶，其制备方法是：

1、将3-5克胶原蛋白肽粉溶于100毫升PBS缓冲液；

2、调节pH值到6-7.4；

3、在100ml胶原蛋白肽溶液中加入30ml氮氮二甲基间酰胺，充分搅拌溶解；

4、然后加入4-5毫升三乙胺搅拌至充分溶解；

5、再加入8-10毫升甲基丙烯酸酐，搅拌过夜，至充分溶解；

6、间断搅拌，反应3天；

7、用1000道尔顿分子量大小透析袋透析三天，间断换水；

8、将透析后的肽溶液置于皿中预冻；

9、放入冻干机冻干；

10、最后收集粉末保存。

本发明有益效果为：本发明以鱼类提取为主，通过酸碱、酶切等技术把分子量控制在6000道尔顿以内的胶原蛋白肽，具有很好的溶解度和保水能力，以及低的免疫原性和生物可降解性。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例：

一种深海鱼胶原白肽水凝胶，其制备方法是：

1、将5克胶原蛋白肽粉溶于100毫升PBS缓冲液；

2、调节pH值到7.4；

3、在100ml胶原蛋白肽溶液中加入30ml氮氮二甲基间酰胺，充分搅拌溶解；

4、然后加入5毫升三乙胺搅拌至充分溶解；

5、再加入10毫升甲基丙烯酸酐，搅拌过夜，至充分溶解；

6、间断搅拌，反应3天；

7、用1000道尔顿分子量大小透析袋透析三天，间断换水；

8、将透析后的肽溶液置于皿中预冻；

9、放入冻干机冻干；

10、最后收集粉末保存。

本具体实施方式的使用方法：

1、用培养基配制百分之十五的胶原溶液；

2、调节pH值至7.4；

3、过滤除菌；

4、消化细胞，加入培养基终止消化，离心收集；

5、用少量培养基重悬细胞；

6、将少量密度细胞悬液加入肽溶液；

7、每毫升加入10微升百分之10的I2959溶液；

8、迅速接种孔板，365纳米波长紫外照射10至20分钟即可。