[发明专利]一种万古霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒

说明书

本发明公布了一种万古霉素的化学发光酶联疫检测试剂盒，属于酶联免疫吸附分析技术领域。所述的试剂盒中的组分包括：包被有万古霉素包被抗原的化学发光板；万古霉素特异性抗体；酶标二抗；万古霉素标准品溶液；磷酸盐缓冲液；洗涤液；底物显色液。本发明的化学发光酶联免疫试剂盒利用万古霉素多克隆抗体进行免疫检测，灵敏度IC₅₀＝143.94ng/mL，在血浆中回收率为93.92～106.90％之间，变异系数小于15.07％。本发明的化学发光酶联免疫试剂盒检验方法简便易行，具有特异性强，灵敏度高，准确度高等特点，将在临床中实时监测万古霉素血药浓度发挥重要作用。

技术领域

本发明涉及一种用于检测血浆中万古霉素含量的化学发光酶联免疫检测试剂盒，属于药品的检测分析技术领域。

背景资料

万古霉素(Vancomycin)，其分子量为1449.26，是通过放线菌属的东方拟无枝酸菌发酵产生，是三环糖苷化非核糖体肽的一种分支产物，属于抗生素的一种，其作用机制是抑制革兰氏阳性菌细胞壁中的磷脂和多肽的合成而使细菌无法生存，该药对耐青霉素葡萄球菌具有极强的作用效果，是对抗革兰阳性菌最有力的抗生素之一。现主要用于耐药菌感染的治疗，也用在难辨梭菌酿成的抗生素耐药性的伪膜性肠炎的治疗，及抵抗“超级细菌”的终极防线。万古霉素具有良好的抗菌效果，但其通常不作为一线药物应用，主要原因是由于其治疗窗狭窄，一般认为谷浓度高于15μg/mL，峰浓度超过80μg/mL为中毒范畴，会引起一定的不良反应。不良反应包括肾损害严重，耳毒性，有时伴有荨麻疹等过敏现象。

当前用于检测万古霉素血药浓度的手段主要有高效液相色谱法，微生物分析法及免疫分析法。高效液相色谱法需要专业人士操作，操作相对繁琐耗时，而且仪器、试剂、耗材及后期维护等费用相对较高，不利于高通量监测万古霉素的血药浓度，尤其是在欠发达地区，应用受限。微生物分析法灵敏度高，但存在操作复杂、耗时长等局限性，需要进行改良，简化实验步骤，缩短实验周期。免疫分析法，包括放射性免疫分析法及荧光偏振免疫分析法。其中放射免疫分析是以放射性同位素为标记物的免疫分析方法，该法因存在放射性污染等不足而逐渐被取代。而荧光偏振免疫分析法检出限一般在0.1-10ng之间，灵敏度较其他免疫分析法较低且合成的tracer具有选择性较低等缺点。化学发光酶联免疫分析法作为一种新型有效的检测，近年来获得了迅速的发展，已广泛应用到食品，环境及药品领域当中。

化学发光酶免疫分析法是建立在酶联免疫分析法基础上，利用化学发光强度与抗原抗体特异性反应结合而建立起来的分析方法，具有灵敏度高且及线性范围宽等优点。

基于抗原-抗体反应，省去了样品冗长而繁琐的前处理过程，更适于成分较为复杂难于分离处理的样品检测。化学发光酶免疫分析法运用到各个领域中，包括医疗领域，食品安全，环保问题等。化学发光酶免疫分析法体系中一般采用的是鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶(HRP)/碱性磷酸酯酶(ALP)发光系统^[39]，并且采用对碘苯酚(PIP)作为发光增强剂。

发明内容

本发明的目的是解决传统检测方法存在的不足，提供一种操作简便，费用低廉，灵敏度高，能够现场监控且适合大量样本筛查的，用于检测血浆中万古霉素含量的化学发光酶联免疫检测试剂盒及方法。

本研究在获得完全抗原，制备万古霉素特异性抗体的基础上，建立了针对万古霉素的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法，用于定量检测血浆中万古霉素的含量，结果表明该方法简便，快速，特异性强，灵敏度高。

本发明的检测原理为：

当在微孔条上预包被生物素包被抗原时，加入样本溶液或标准品溶液后，再加入万古霉素特异性抗体溶液，样本中的万古霉素或万古霉素标准品与微孔中包被的万古霉素包被抗原竞争万古霉素特异性抗体，加入酶标二抗进行放大作用，用显色液显色，样本发光值与样本中万古霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中万古霉素的含量。

本发明提供的万古霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒中的试剂组成包括：