[发明专利]一种从全血中分选活性有核细胞并精准涂片的方法

权利要求书

1.一种从全血中分选活性有核细胞并精准涂片的方法，其特征在于，包括：

利用离心装置对全血进行离心，以去除所述全血中的红细胞；

加入荧光试剂以识别所述全血中去除红细胞所得的活性有核细胞亚群；

在流式细胞仪上对识别出的所述全血中去除红细胞所得的活性有核细胞亚群进行分选；

将分选出的所述活性有核细胞收集到含有缓冲液或培养液的收集装置中，并利用离心涂片机对所述收集装置进行涂片，以将所述活性有核细胞精准涂在与所述收集装置连接的载玻片上；

其中，所述将分选出的所述活性有核细胞收集到含有有缓冲液或培养液的收集装置中的步骤包括：

调整所述流式细胞仪输出所述活性有核细胞的方向和/或所述收集装置的位置，使所述活性有核细胞恰好射入所述收集装置中；

将分选出的所述活性有核细胞注入到设有缓冲液的收集装置中；

所述利用所述离心涂片机对所述收集装置进行涂片，以将所述活性有核细胞涂在与所述收集装置连接的载玻片上的步骤包括：

将所述收集装置与所述载玻片连接；

将设有所述载玻片的所述收集装置固定在所述离心涂片机上；

启动所述离心涂片机，使得所述收集装置跟随所述离心涂片机转动，从而将所述收集装置中的所述活性有核细胞涂到所述载玻片上。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光试剂包括Hoechst33342。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用离心机对全血进行离心，以去除所述全血中的红细胞的步骤包括：

利用所述离心机以转速范围为800-2000转/分钟对新鲜抗凝的全血进行离心3-10分钟，使所述全血中的血浆与血细胞分离；

抽取所述血细胞；

利用所述离心机以转速范围为1500-2500转/分钟对所述血细胞进行离心3-10分钟，以从所述血细胞获取白细胞层；

将所述白细胞层放入缓冲液中制成细胞悬浮液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加入荧光试剂以识别所述全血中去除红细胞所得的活性有核细胞亚群的步骤包括：

加入Hoechst33342染料以识别所述全血中去除红细胞所得的活性有核细胞；

对Hoechst33342设阈值，以识别所述活性有核细胞亚群。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述加入Hoechst33342染料以识别所述全血中去除红细胞所得的活性有核细胞的步骤包括：

加入Hoechst33342至所述细胞悬浮液，使所述细胞悬浮液的浓度处于1-30微克/毫升；

将所述细胞悬浮液处于37度水浴箱中孵育30-90分钟，且每10分钟混匀一次；

加入4度预冷的1-4毫升缓冲液；

利用所述离心机以转速范围为800-2000转/分钟对所述细胞悬浮液进行离心3-5分钟，并吸去上清液；

加入300-500微升缓冲液；

加入PI染料，使得所述细胞悬浮液的浓度范围为0.5-0.8微克/毫升。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述收集装置包括第一管体和所述第一管体连通的第二管体，其中所述第一管体和所述第二管体的连接呈L型状设置，且所述第一管体设置在流式细胞仪用于输出活性有核细胞的输出口的下方。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述收集装置的所述第一管体和所述第二管体的连接处的内壁呈弧形状。