[发明专利]一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒

权利要求书

1.一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，包括PCR反应液，PCR反应启动液、PCR反应酶系，HCV特异性引物及探针，内标18S RNA的特异性引物及探针，阴阳性质控品，其特征在于：所述的HCV特异性引物及探针、内标18S RNA的特异性引物及探针序列如下：

检测HCV的上游引物F1的序列为：

CCTACTACCGCGGTCTTGACGTGTCTGTCATC；

检测HCV的下游引物R1的序列为：CAGTCTATCACCGAGTCGAAATCGCCGGTAAAGCC；

检测HCV的荧光探针P1序列为：FAM-CGGCCAGTG(dSpacer)CGATGTTGTCGTAGTGGCAAC-BHQ；

检测内标18SRNA的上游引物F1序列为：CCGATCGCACGCCCCCCGTGGCGGCGACGACC；

检测内标18SRNA的下游引物R1的序列为：CCCGTCACCCGTGGTCACCATGGTAGGCAC；

检测内标18SRNA的荧光探针P1序列为：

HEX-CGAACGTCT(dSpacer)CCCTATCAACTTTCGATGGTAGTC-BHQ。

2.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：其PCR反应液成分包括：

Tris-缓冲液 50~100mmol/L

KCl 20~60mmol/L

二硫苏糖醇2~5mmol/L

甜菜碱0.5~2mol/L

海藻糖1%~4%

PEG 2%~5%

BSA 0.1~0.6mg/mL。

3.根据权利要求2所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：Tris-缓冲液可选自Tris-H₂SO₄、Tris-乙酸、Tris-HCl中的任意一种或多种，Tris-缓冲液的pH为7.0～9.0。

4.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：其PCR启动液成分包括：

Mg²⁺ 8mM~30mM 。

5.根据权利要求4所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：Mg²⁺来自于硫酸镁、乙酸镁、氯化镁中的任意一种或多种。

6.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：其PCR反应酶系成分包括：

dNTPs180~250μmol/L

聚合酶Bsu120~160ng/μl

单链结合蛋白 200~700ng/μl

重组酶 100~300ng/μl

逆转录酶 0.05~0.9U/μl。

7.根据权利要求6所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：重组酶选自E.coli RecT蛋白；λ噬菌体β蛋白；啤酒酵母SepΙ/STPβ；啤酒酵母DPA蛋白；啤酒酵母STPα蛋白；粟酒裂殖酵母p¹⁴⁰/Exoǁ蛋白以及RrpΙ、HPP-Ι、v-SEP、ICP8蛋白。

8.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：HCV探针连接的荧光基团不同于内标18SRNA探针连接的荧光基团。

9.根据权利要求1、2、4、6所述的一种丙型肝炎病毒（HCV）恒温检测试剂盒，其特征在于：恒温扩增的扩增温度为35℃~42℃。