[发明专利]CDK5抗原表位肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子免疫学领域，涉及抗原表位肽，具体涉及HLA-A0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的CDK5表位肽及其应用。

背景技术

胶质瘤是神经系统最常见的恶性肿瘤，复发率高，预后差。主要原因是肿瘤的残留病变难以消除。免疫治疗可以进一步清除手术、放化疗后的微小残留病灶，从而可以减少或避免胶质瘤的复发。但是寻找肿瘤相关抗原是肿瘤免疫治疗的关键，研究者不断筛选新的肿瘤相关抗原以最终达到针对每位患者个体化治疗的目的。研究显示，细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)在胶质瘤中高表达，并与PD-L1表达相关。下调或者抑制CDK5蛋白的表达会使胶质瘤细胞显著凋亡。本研究将CDK5蛋白作为胶质瘤免疫治疗的候选靶抗原，并以表位肽来替代蛋白质作为靶点。

因此，本领域技术人员致力于开发一种HLA-A0201限制性细胞毒性T淋巴细胞识别的CDK5表位肽。

发明内容

有鉴于现有技术中肿瘤特异性抗原的免疫原性不够强等问题，本发明提供了一种CDK5抗原表位肽及其应用。

本发明的第一方面提供了一种CDK5抗原表位肽，其选自以下任一项：

1)含有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的肽；

2)含有SEQ ID No.3所示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的肽；

3)通过对SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的氨基酸序列添加、缺失或替换一个或多个氨基酸形成的氨基酸序列组成的肽，该肽能与HLA-A0201分子形成复合物而被HLA-A0201限制性细胞毒性T淋巴细胞识别或诱导HLA-A0201限制性细胞毒性T淋巴细胞。

进一步地，上述抗原表位肽为SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的氨基酸序列组成的肽。

本发明的第二方面提供了一种核苷酸序列，该核苷酸序列编码上述抗原表位肽的氨基酸序列。

本发明的第三方面提供了一种抗原呈递细胞，该抗原呈递细胞脉冲以上述抗原表位肽。

本发明的第四方面提供了一种主要组织相容性抗原复合物，其包括HLA-A0201分子和上述抗原表位肽。

本发明的第五方面提供了一种细胞毒性T淋巴细胞诱导剂，该细胞毒性T淋巴细胞诱导剂的活性成分包括：

1)如上所述的抗原表位肽；

2)如上所述的抗原呈递细胞；或

3)如上所述的主要组织相容性抗原复合物。

本发明的第六方面提供了一种癌症疫苗，该癌症疫苗的活性成分包括：

1)如上所述的抗原表位肽；

2)如上所述的抗原呈递细胞；或

3)如上所述的主要组织相容性抗原复合物。

进一步地，上述癌症为胶质瘤。

本发明还提供了上述抗原表位肽在制备治疗癌症的药物中的应用。

优选地，癌症为胶质瘤。

本发明通过在线筛选、T2细胞亲和性和稳定性实验，筛选获得了两条目的抗原表位肽aa106和aa164。他们在健康供者及患者外周血中均存在，这为后续的研究供了必要条件。

通过上述抗原表位肽，在专制抗原提呈细胞(如DC)的辅助下，激活CTL并使之扩增。激活后的CTL作用于CDK5蛋白来阻断免疫耐受及免疫忽视，提高其免疫原性，从而有效地杀伤胶质瘤细胞，但是其对正常造血细胞没有杀伤作用。据推测，在CDK5-CTL细胞下调了肿瘤细胞CDK5表达后，将会极大的恢复正常的活化T淋巴细胞的清除肿瘤作用。

附图说明

图1是本发明一个实施例的T2细胞亲和实验结果图。其中，阴性对照FLU-matrix为流感基质蛋白，阳性对照为HIV pol，aa106和aa164为两条预测的肽段。

图2是本发明一个实施例的T2细胞结合稳定性实验结果图。

图3是本发明的一个实施例的CDK5-CTL中CD8+的细胞的CD45RA表达情况结果图。

图4是本发明的一个实施例的CDK5-CTL中CD8+的细胞的CD45RO表达情况结果图。

图5是本发明一个实施例的CDK5-CTL增殖实验结果图。

图6是本发明一个实施例的CDK5-CTL细胞杀伤实验结果图。

图7是本发明一个实施例的CDK5-CTL细胞功能实验结果图。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明作进一步地说明，应理解这些实施例仅作为例证的目的，不用于限制本发明的保护范围。

以下具体实施方式中使用的试剂，如无特殊说明，均可直接购买获得。