[发明专利]一种异种脱细胞真皮基质的制备方法

说明书

本发明涉及一种异种脱细胞真皮基质的制备方法，其包括以下步骤：以巴马香猪皮为皮源，皮鼓反取成断层皮片，经过去皮、脱细胞等步骤处理得到脱细胞真皮，进一步将脱细胞真皮与羧甲基壳聚糖进行反应制成脱细胞真皮基质，最后经柔化剂、保湿剂的处理，使制得的脱细胞真皮基质更接近人体皮肤的自然状态，提高其使用的依从性。经本发明方法制得的异种脱细胞真皮基质免疫原性低，并有保持真皮胶原纤维的三维结构的立体构造，提高真皮胶原纤维的三维结构的稳定性，且具有较佳的生物相容性。

技术领域

本发明属于组织工程皮肤技术领域，具体涉及一种异种脱细胞真皮基质的制备方法。

背景技术

烧伤、创伤、上皮癌切除及皮肤疾病等因素造成的皮肤缺损常遗留瘢痕增生和挛缩畸形，严重影响外观和功能。目前，用于修复创面的修复材料除了自体皮、皮瓣外，主要有异体皮、异种皮以及各种人工合成的创面覆盖物。在治疗大面积烧伤患者时，患者自体皮源有限，就需要应用这些皮肤替代物；异体皮来源有限，并有传染疾病的风险，且受到伦理学的制约；人工合成材料技术尚不成熟，抗感染能力较差，且价格昂贵。因此寻求能植入人体内，组织相容好，免疫性低的用于烧伤、整形美容及作为组织填充物的异种真皮是目前国内外研究的热点。

脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix，ADM)是一种去表皮、脱细胞，无细菌生长、无毒性、无刺激性、无免疫排斥反应，有弹性、质地柔软、不断裂的组织工程学材料，主要应用于组织创面修复。脱细胞真皮基质取材于天然的皮肤组织，经过特殊的理化处理，将组织中可能引起人体植入后的免疫排异反应的成分去除，同时保留了原有组织的立体支架结构，可诱导成纤维细胞、血管内皮细胞长入，具有诱导组织再生的作用，是治疗需要植皮的全层皮肤缺损有效的方法。但是，已有的脱细胞真皮基质生产工艺存在以下不足：不能有效去除异种皮细胞，降低异种皮肤抗原性的同时保留完整的真皮胶原纤维的三维结构；脱细胞真皮基质在制备过程中，透明质酸、硫酸皮肤素、硫酸肝素等细胞外无定形基质成分也随细胞成分同时被洗出，使胶原支架失去原有的外环境保护，移植于创面后，降解速度较快，存在局部溶解倾向；此外，脱细胞真皮基质在使用时容易容易导致创面感染。因此临床上迫切需要一种低免疫原性、可供移植的皮肤替代物。

公开号为CN 102580153 B的中国专利申请“一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法”，将动物皮肤通过制备断层皮片、病毒灭活、脱脂、脱细胞、冻干、裁剪、成型、包装和辐照消毒工艺后得到脱细胞真皮基质医用组织补片，具有脱细胞彻底，对真皮细胞外基质天然结构损害轻的优点。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种异种脱细胞真皮基质的制备方法。

本发明提供的技术方案为如下：

本发明提供一种异种脱细胞真皮基质的制备方法，其包括以下步骤：

(1)选用巴马香猪皮为皮源，对取皮区进行脱毛、消毒，用取皮机取下大张皮肤，无菌生理盐水清洗，皮鼓反取成0.25～0.5mm的断层皮片，采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，备用；

(2)将步骤(1)制得的断层皮片浸泡于0.5～1.0％(m/v)的邻苯基苯酚钠水溶液中，处理6～8min，无菌生理盐水清洗3～4次，然后加入1～2％(m/v)三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液，超声震荡处理6～12h，每2h更换一次溶液，其中加入的三羟甲基甲胺基乙磺酸水溶液与断层皮片的重量比为10:1，得到去表皮的真皮；

(3)将步骤(2)得到的去表皮的真皮置于0.2～0.4％TritonX-100(v/v)溶液中，室温下振荡洗涤6～12h，用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次，加入脱细胞处理液，在37℃条件下作用12～24h，所述的脱细胞处理液与去表皮的真皮的重量比为10:1，用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次，再用无菌生理盐水清洗3～4次，得到脱细胞真皮；