[发明专利]可用于富集人L1CAM蛋白的抗原多肽和单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种可用于富集人L1CAM蛋白的抗原多肽和单克隆抗体。本发明采用设计多肽抗原免疫，巧妙的抗体筛选设计，以一种非常简单的方式就获得具有与16周左右的人胎脑悬浮液免疫原获得的具有富集人L1CAM蛋白相同功能活性的抗体，而且有些抗体还可以用于WB方式识别人L1CAM的各种形式蛋白的生物学功能。

技术领域

本发明涉及一种可用于富集人L1CAM蛋白的抗原多肽和单克隆抗体。

背景技术

现有的能够富集人L1CAM(神经细胞黏附分子L1)蛋白的抗体，抗原是来源于16周人胎脑悬浮液，对于一般的抗体生产和研发公司来说，要想得到同样来源的抗原是很难的，而且用16周左右的人胎脑悬浮液免疫后，后期的单抗的筛选方法比较复杂，而且筛选难度很大，成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用于富集人L1CAM蛋白的抗原多肽和单克隆抗体。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种可用于富集人L1CAM蛋白的抗原多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

一种可用于富集人L1CAM蛋白的抗原多肽，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

一种可用于富集人L1CAM蛋白的单克隆抗体，包括以下步骤的方法制备：

A、将抗原多肽偶联到KLH蛋白上；

B、将偶联好的多肽-KHL偶联物通过sepdexG250进行纯化；

C、纯化后免疫小鼠，之后进行细胞融合；

D、对融合后的细胞进行筛选；

E、将筛选的细胞株进行亚克隆，挑选单克隆细胞，并对表达的抗体进行生物学活性验证；

F、对生物活性验证过的细胞株进行抗体制备。

作为优选方式，所述步骤C中，免疫小鼠，按照80ug/只/次的剂量进行皮下注射免疫，共免疫四次，每次免疫的时间间隔为2周，初次免疫用完全佐剂，随后的3次免疫用不完全佐剂，免疫结束后，采集免疫小鼠血清进行抗体的免疫效价以及生物学功能监测，选择最合适的小鼠进行最终的加强免疫，加强免疫为不用任何佐剂，直接按照50ug剂量进行小鼠腹腔免疫。

本发明涉及两条多肽，CD-17(CREGSQRKHSKRHIHKD)和CY-17(CNQSSYTQWDLQPDTDY)。我们对L1CAM进行蛋白结构进行分析，利用相关抗原设计软件对L1CAM蛋白进行抗原表位设计，最终从L1CAM截取了REGSQRKHSKRHIHKD和NQSSYTQWDLQPDTDY肽段，为了便于偶联载体蛋白，在肽段的前面加上半胱氨酸(C).

其中CD-17是人鼠同源的序列，可以用鼠标本代替人标本来检测抗体的活性，本实验中用鼠的脑组织裂解液来验证了CD-17的几个抗体对人L1CAM蛋白WB检测阳性的可能性，确定了我们筛选的CD-17抗原产生的单克隆抗体具有良好的WB检测功能.我们通过两个多肽的免疫，获得最终分别获得了针对CD-17和CY-17的单克隆抗体，其中针对CD-17多肽的单克隆抗体不但可以用来富集L1CAM蛋白，还可以用于L1CAM蛋白的WB检测。针对CY-17多肽的单克隆抗体仅仅可以用来富集L1CAM蛋白。

抗体筛选方法以及活性验证的设计：在筛选方法中，我们巧妙的实验设计节省了筛选成本，绕过了筛选过程的最大障碍。

常规富集痕量蛋白的方法是，用蛋白对应的具有IP生物活性的抗体偶联在磁珠上，然后用这个磁珠分散在样品血浆或者裂解液中，通过抗原抗体的相互作用，形成磁珠-抗体-抗原复合物，然后在一定磁场的作用下，磁珠-抗体-抗原复合物被收集起来，然后洗脱下抗原，就完成了抗原富集。