[发明专利]与甘肃高山细毛羊羊毛细度相关的遗传标记及其应用有效
| 申请号： | 201710326605.3 | 申请日： | 2017-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN107034281B | 公开（公告）日： | 2020-10-20 |
| 发明（设计）人： | 王继卿;罗玉柱;胡江;刘秀;李少斌;朱建勋 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人： | 吕玉博 |
| 地址： | 730000 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘肃 高山 细毛羊 羊毛 相关 遗传 标记 及其 应用 | ||
1.与甘肃高山细毛羊羊毛细度相关的遗传标记在鉴定甘肃高山细毛羊羊毛细度中的应用，其特征在于：所述应用包括以下步骤：
（1）提取待测羊的基因组DNA；
（2）以待测羊的基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；
（3）检测PCR扩增产物，如果扩增序列的开放阅读框区中，等位基因为A，羊毛较细；等位基因为B，羊毛较粗；
所述遗传标记位于KRTAP15-1基因上，具体的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1；
在序列表SEQ ID No.1的核苷酸序列中，其编码区存在6个SNPs：c.133A/G、c.171C/T、c.229C/T、c.245T/C、c.323G/A和c.339T/C；
所述等位基因A为：在序列表SEQ ID No.2的核苷酸序列中，第133bp处的碱基为A，第171bp处的碱基为C，第229bp处的碱基为C，第245处的碱基为T，第323处的碱基为G，第339处的碱基为T；
所述等位基因B为：在序列表SEQ ID No.3的核苷酸序列中，第133bp处的碱基为A，第171bp处的碱基为C，第229bp处的碱基为T，第245处的碱基为C，第323处的碱基为A，第339处的碱基为C；
所述引物对为：
5'-GAACTCAGGAATCCCAACAG-3；
5'-TAACCATGAGGTGACTGGAG-3。
2.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于：步骤（2）中，所述PCR反应使用的扩增体系以20μL 计为：DNA 模板 1.0μL、10×PCR buffer 2.0μL、上下游引物各0.5μL、150μMdNTPs 0.3μL、0.5U TaqDNA polymerase 0.2μL 和 ddH2O 15.5μL。
3.根据权利要求 2 所述的应用，其特征在于：步骤（2）中，所述 PCR 反应的条件为：
94℃预变性 2 分钟，94℃变性 30 秒，60℃退火 30 秒，72℃延伸 30 秒，共 35 个循环，最后延伸 5 分钟。
4.根据权利要求 2 所述的应用，其特征在于：步骤（3）中，所述检测 PCR 扩增产物采用 SSCP 检测，同时设置阳性对照，凝胶电泳后染色，得到 SSCP 电泳带型图，根据图谱中条带的类型和阳性对照结果对待测样本的羊毛细度性状进行判断。
5.权利要求1所述与甘肃高山细毛羊羊毛细度相关的遗传标记在甘肃高山细毛羊羊毛细度分子标记辅助育种中的应用。
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