[发明专利]小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法

权利要求书

1.小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)菌丝培养：在土壤浸提液培养基上培养小麦矮腥黑粉菌冬孢子，待冬孢子萌发后转接到T19液体培养基中振荡培养，在土壤浸提液培养基上培养的天数与在T19液体培养基中振荡培养的天数总共为40～50天，收集菌丝体；

(2)细胞壁裂解：以KCl溶液作为渗透压稳定剂，配制混合酶液，加入到菌丝体中，28℃振荡酶解2～3小时，即得到小麦矮腥黑粉菌原生质体；

所述混合酶液包括质量百分比浓度为1.5％的崩溃酶、1.5％的溶壁酶和1.5％的蜗牛酶。

2.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述在土壤浸提液培养基上培养的天数与在T19液体培养基中振荡培养的天数总共为45天。

3.根据权利要求2所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述在土壤浸提液培养基上培养小麦矮腥黑粉菌冬孢子的天数为30～35天，所述转接到T19液体培养基中振荡培养的天数为10～15天。

4.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述28℃振荡酶解的时间为2.5小时。

5.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述在土壤浸提液培养基上培养小麦矮腥黑粉菌冬孢子的培养条件为温度为5℃和相对湿度为50％；所述转接到T19液体培养基中振荡培养的培养条件为温度为5℃和转速为150rpm。

6.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述KCl溶液的浓度为1.2mol/L。

7.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述混合酶液与所述菌丝体的配比为20ml：1g。

8.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述振荡酶解在180r/min的转速下进行。

9.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述土壤浸提液培养基的制备方法为：称取75g灭菌土壤，溶于500ml沸水后，过滤，取滤液，加入20g琼脂粉，然后加水定容至1L，121℃高压蒸汽灭菌。

10.根据权利要求1所述的小麦矮腥黑粉菌原生质体的制备方法，其特征在于，所述T19液体培养基的配方为：KH₂PO₄ 613mg/L，MgSO₄·7H₂O 246mg/L，K₂HPO₄·3H₂O 114mg/L，CaCl₂55.5mg/L，螯合Fe 20mg/L，ZnSO₄·7H₂O 3.52mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.38mg/L，MnSO₄·H₂O 0.31mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.025mg/L，氯化硫胺素5mg/L，L-天冬酰胺3mg/L，蔗糖20mg/L。