[发明专利]一种总胆汁酸测定试剂盒及其测定方法

说明书

本发明提供一种总胆汁酸测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括如下组分及其浓度：三羟甲基氨基甲烷10～20g/L、6N HCL 16～25g/L、硫代氧化型辅酶I 0.6～2g/L、KCL 6～15g/L；所述试剂R2包括如下组分及其浓度：三羟甲基氨基甲烷10～20g/L、6N HCL 16～25g/L、还原型辅酶I 4～8g/L、3a‑羟类固醇脱氢酶6～15KU/L、聚乙二醇80～130g/L、甜菜碱溶液0.4～1.1ml/L。本发明属于生物检测技术领域，本发明提供的总胆汁酸测定试剂盒在提高试剂稳定性的同时显著增强了抗干扰能力，用于总胆汁酸的测定准确性好。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种总胆汁酸测定试剂盒及其测定方法。

背景技术

胆汁酸(3α-羟类固醇)是胆汁的重要组成成分，主要包括甘氨胆酸、脱氧胆酸、鹅去氧胆酸和石胆酸等存在形式，这些胆酸合起来称为总胆汁酸(TBA)。血清中的胆汁酸水平是反映肝实质损伤的重要证据，尤其在急性肝炎，慢性活动性肝炎、乙醇肝损伤和肝硬化时有较灵敏的变化。肝细胞发生病变时，血液中胆汁酸的含量升高。现有研究认为血清中胆汁酸的测定，对肝胆疾病的诊断其敏感性高达70％以上，特异性高达90％以上，在肝硬化等慢性肝病发生时，胆汁酸升高的出现比白蛋白、胆固醇和胆固醇酯等的改变来得更早，因此对慢性肝病的诊断有重要意义。

TBA的测定方法包括色谱法、酶联免疫法和酶学法等，酶学法由于检测快速渐变，应用广泛。目前酶学法主要采用五代循环酶法胆汁酸测试试剂盒，均采用游离的酶以及辅酶，酶和辅酶的用量较大，稳定性较差。胆汁酸被3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)及β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特异性地氧化，生成3-酮类固醇，同时β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)被还原成β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)，新生成的3-酮类固醇在3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)及β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)存在下，还原成胆汁酸，同时β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)氧化为β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(NAD)。通过上述原理，血清中微量的胆汁酸在多次酶循环的过程中被放大，同时使生成的β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)扩增。通过405nm处测定β-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH)吸光度的变化率，可求得样本中胆汁酸的含量。

中国专利申请CN1632578公开了一种胆汁酸测定试剂，包括试剂1和试剂2，试剂1包括甘氨酸、Thio-NAD、Triton X-100和丙酮酸钠等；试剂2包括3αHSD、NADH、苯基或烷基二醇、Triton X-100和硼氢化物等；加入硼氢化物和苯基或烷基二醇作为NADH的稳定剂。

中国专利申请CN 102539791公开了一种测定总胆汁酸含量的试剂，由试剂1和试剂2两部分组成，试剂1中含有氧化型β-硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、缓冲剂、表面活性剂、稳定剂和防腐剂，所述试剂2中含有还原型辅酶Ⅰ、羟类固醇脱氢酶、缓冲剂、表面活性剂、稳定剂以及防腐剂；试剂1和试剂2中均含有稳定剂和表面活性剂，稳定剂选自海藻糖、甘露醇、聚乙二醇、EDTA等的一种或几种，表面活性剂选自：吐温-20、曲拉通X-100、Brij 35等的一种或几种。

现有的试剂盒使用的稳定剂种类较多，虽然可以提高稳定性，但抗干扰能力往往不够理想。因此，提供一种稳定性好且抗干扰能力好的胆汁酸测定试剂盒具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题(抗干扰能力不够理想)，本发明提供一种总胆汁酸测定试剂盒，通过添加一定浓度的聚乙二醇1200和甜菜碱，在提高试剂盒稳定性的同时显著增强了抗干扰能力，可显著降低胆红素、血红蛋白和甘油三酯等的干扰，用于总胆汁酸的测定准确性好。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。