[发明专利]一株传染性胸膜肺炎放线杆菌及其应用

说明书

本发明公开了一株传染性胸膜肺炎放线杆菌及其应用，所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌为胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)HNAPP1，保藏编号：CGMCC NO：13333，保藏日期：2016年11月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明中的菌株HNAPP1分离自发生典型呼吸困难急性死亡的育肥猪的心脏，在TSA固体培养基上分离时无其它细菌生长，只有传染性胸膜肺炎放线杆菌生长，在TSB液体培养基中增殖滴度高，达10⁹CFU/mL以上。本发明中的菌株HNAPP1对保育猪具有较强的致病力，引起保育猪发病死亡，具有良好的免疫原性。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别涉及一株传染性胸膜肺炎放线杆菌及其应用。

背景技术

传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae,APP)是引起猪传染性胸膜肺炎(Porcine infection Pleuropneumonia)的病原，是一种猪的高度接触性传染性呼吸道疾病，主要表现为爆发性流行，以纤维素性、出血性、坏死性肺炎为特征，发病率在8.5％～100％之间，死亡率在0.4％～100％之间，是当前育肥猪和种猪死亡的主要原因之一。因此传染性胸膜肺炎放线杆菌的防治对于养猪业的健康发展具有重大的意义。

胸膜肺炎放线杆菌血清型多达15种，且目前还有很多不能定型的临床分离菌株，各血清型之间缺乏有效的交叉免疫保护，不同国家、地区和猪场流行的优势血清型又不尽相同，因此，APP的分离鉴定和分型在该病的防治中尤为重要。国内流行的血清型主要是1，2，3，5，7型，APP外毒素在致病与免疫中起着重要作用，APP一共有4种外毒素，即毒素Apx Ⅰ、Apx II、ApxⅢ和ApxⅣ，而且毒素Apx Ⅰ和Apx II在APP毒力方面起着关键作用。不同血清型分泌的外毒素不一样。血清1型能同时分泌毒素Apx Ⅰ、Apx II和ApxⅣ，是所有血清型毒株中毒力最强、免疫原性最好的毒株，同时也是我国流行的一种优势血清型毒株。目前，亟需一种新的具有较好免疫原性的菌株制备的疫苗。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一株传染性胸膜肺炎放线杆菌及其应用，该菌株毒力强，制备的疫苗免疫性好。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一株传染性胸膜肺炎放线杆菌，所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌为胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)HNAPP1，保藏编号：CGMCC NO：13333，保藏日期：2016年11月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌为传染性胸膜肺炎放线杆菌1型。

一种传染性胸膜肺炎放线杆菌在制备传染性胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗方面的应用。

所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗中，传染性胸膜肺炎放线杆菌菌量为1×10⁹CFU/mL。

所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗的制备方法为：将所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌依次经过培养、收获和灭活得到疫苗原液后，加入佐剂即得疫苗。

所述的佐剂为氢氧化铝。

所述的传染性胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗的制备方法为：将传染性胸膜肺炎放线杆菌株HNAPP1接种到TSB液体培养基，置于37℃摇床中培养，18h后收取培养物，测定浓度，调整培养物中的菌数为2×10⁹CFU/mL，加入甲醛至终浓度为0.2％，于37℃灭活12h；灭活后的培养物按体积比1:1加入氢氧化铝佐剂，混合制得传染性胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗。

本发明的有益效果：