[发明专利]一种昆虫病原线虫活体繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种昆虫病原线虫的繁殖方法。

背景技术

昆虫病原线虫作为一种重要的生防因子，可通过寄生昆虫幼虫，有效地控制农田地下害虫和钻驻性害虫。根据昆虫病原线虫繁殖载体的不同，将昆虫病原线虫繁殖方法分为活体繁殖法和离体繁殖法。离体繁殖法就是利用人工培养基，通过昆虫病原线虫随身携带的共生细菌进行昆虫病原线虫繁殖，目前国内外均是采用该技术繁殖昆虫病原线虫，进行大量生产。但该技术对生产条件要求比较严格，且多采用液体发酵技术生产，导致生产成本高、技术难掌握。本发明是利用昆虫病原线虫寄主进行活体繁殖的工厂化生产，该技术简化了生产过程，降低了生产成本和难度。

昆虫病原线虫是昆虫的专化性寄生天敌，可寄生鞘翅目﹑双翅目﹑同翅目﹑膜翅目、等翅目﹑鳞翅目﹑脉翅目﹑蜻蜓目和直翅目等近250多种昆虫。该类线虫可从昆虫的肛门、气孔、节间膜或随寄主食物进入昆虫体内，释放携带的共生细菌，使寄主昆虫患败血病死亡。因此，人们利用该线虫的特点进行害虫生物防治，该线虫对人畜安全，不污染环境。它具有寄主广泛、主动寻找寄主、高效、快速、安全、易规模化生产等优点，尤其对于一些化学药剂难以防治的钻蛀性害虫和土壤害虫，有很好的防治效果。随着化学杀虫剂污染越来越严重、人们对害虫无公害控制技术的渴望和害虫抗药性的增强，害虫生物控制也逐步引起人们的重视，昆虫病原线虫作为一种很有潜能的生防因子，近年在国内外生物防治领域发展迅速。

昆虫病原线虫能否作为一种生防制剂在工业上大面积应用，关键在于解决线虫的高效生产技术问题。目前国际上活体繁殖技术主要是采用大蜡螟(Galleria mellonella)进行繁殖，但现今该技术仅局限于实验室试验繁殖，产量极低，也有利用黄粉虫生产线虫，但该技术要借助固体载体进行繁殖，技术繁琐。

发明内容

本发明是为了解决昆虫病原线虫活体繁殖效率低，无法工厂化生产的问题，提供一种昆虫病原线虫活体繁殖方法。

本发明昆虫病原线虫活体繁殖方法，按以下步骤进行：

一、选择健康的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾(Prodenia litura(Fabricius))6龄幼虫为昆虫病原线虫繁殖寄主；

二、将斜纹夜蛾幼虫放置于容器中，放置密度为1头/4cm²，使斜纹夜蛾幼虫饥饿9～11小时后，将侵染期昆虫病原线虫接种到斜纹夜蛾幼虫上，在室温下进行侵染繁殖；

所述接种方法为：将侵染期昆虫病原线虫悬浮液均匀喷施到斜纹夜蛾幼虫上，昆虫病原线虫与斜纹夜蛾幼虫的个数比为(0.9～1.1)万:1；

三、线虫收获：昆虫病原线虫在斜纹夜蛾幼虫体内繁殖，待斜纹夜蛾幼虫死亡后，移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫，收集线虫。使用自来水清洗线虫，然后放入冰箱保存。

一般在接种昆虫病原线虫72小时以后，斜纹夜蛾幼虫即死亡，准备收集线虫。

进一步的，所述昆虫病原线虫为斯氏线虫属(Steinernema carpocapsae)的线虫或异小杆线虫属(Heterorhabditis bacteriophora)的线虫。

进一步的，步骤三所述收集线虫的及具体方法为：

移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫到无菌滤纸上，每条滤纸放120-150头斜纹夜蛾幼虫，滤纸下方放有吸了自来水的海绵块，利用昆虫病原线虫趋水性，使线虫爬出斜纹夜蛾幼虫体内，透过滤纸进入有水的海绵块中进行收集。在接种斜纹夜蛾幼虫第5-7天就有昆虫病原线虫爬出，每天收集线虫，收集10天，将线虫放入10℃冰箱保存。

本发明的有益效果：

本发明方法可高效率繁殖昆虫病原线虫，繁殖技术采用的繁殖寄主是鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾(Prodenia litura(Fabricius))幼虫，技术原理是根据昆虫病原线虫可对斜纹夜蛾幼虫进行活体寄生的特性；利用昆虫病原线虫的趋水性进行昆虫病原线虫收集和收获；适合该繁殖方法的昆虫病原线虫包括斯氏线虫属(Steinernema carpocapsae)和异小杆(Heterorhabditis bacteriophora)线虫属。经过12-16天的繁殖可获得昆虫病原线虫，每头斜纹夜蛾幼虫繁殖至少7-8万头昆虫病原线虫。

本发明在72小时以后寄主昆虫已全部死亡，5-7天就有线虫爬出，本方法的繁殖效率高、速度快。

本发明方法使用斜纹夜蛾作为寄主昆虫，其体大，为33-50毫米，斜纹夜蛾幼虫便于繁殖，且产量高。