[发明专利]一种PHBA对映异构体杂质检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析检测技术领域，尤其涉及一种PHBA对映异构体杂质检测方法。

背景技术

PHBA，即(S)-α-羟基-γ-N-邻苯二甲酰亚氨基丁酸，是作为合成药物阿米卡星的重要中间体。阿米卡星俗称丁胺卡那霉素、阿米卡霉素，是第三代半合成氨基糖苷类抗生素，对大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、铜绿假单胞菌及其他假单胞菌、不动杆菌属、产碱杆菌属等具有较强的药理作用；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、耶尔森菌属、胎儿弯曲菌、结核杆菌及某些非结核分枝杆菌属等据有较强的药理作用。阿米卡星又具有低耳毒性、低肾毒性等优势，在氨基糖苷类抗生素中所占的份额已由1999年5％上升到现在的12％，无论是非典型肺炎的治疗还是禽流感的预防，阿米卡星都起到了重要作用，是我国临床广泛应用的抗生素之一。

PHBA的结构式如下：

由于PHBA具有一个手性碳原子，而该手性碳原子的取代基在空间中的

不同取向使其具有S构型和R构型两种化合物，互为对映异构体；其对映

异构体杂即(R)-α-羟基-γ-N-邻苯二甲酰亚氨基丁酸，其结构式如下：

其中，S构型才能用于合成阿米卡星，R构型则为其杂质。由于对映异构体具有相同的物理性质(如熔点、沸点、溶解度、密度等)和化学性质，仅在特殊手性环境下才能体现出差异。因此，一般普通的反相液相色谱法无法分离，需要一种新的方法对这个R构型的杂质进行质量监控。

从目前公开的技术文献来看，PHBA多数采用旋光仪来测定其比旋度，由此来判定其是否具有较高光学纯度。但比旋度法容易受配样溶剂、配样温度、配样浓度以及仪器稳定等多方面影响；而且需要高光学纯度单一对映体作为对照物，所以现有的这种比旋度法存在准确性、稳定性较差，对仪器、操作人员和对照品的要求高等缺点。

另外，《中国药典》规定，杂质与主要成分之间，以及杂质与杂质之间分离度(R)应大于1.5。分离度(R)为相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。分离度计算公式：R＝2(t_R2-t_R1)/(W₁+W₂)。R值越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。当R＝1时，称为4σ分离，两峰基本分离，裸露峰面积为95.4％，内侧峰基重叠约2％。R＝1.5时，称为6σ分离，裸露峰面积为99.7％。R≥1.5称为完全分离。

发明内容

本发明的目的就在于提供一种PHBA对映异构体杂质检测方法，以解决上述问题。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的：一种PHBA对映异构体杂质检测方法，采用正相高效液相色谱法，其中色谱条件如下：

色谱柱：AD-H或AS-H

流动相组成：正己烷：异丙醇＝85:15-80:20(v/v)

流动相流速：0.8-1.2mL/min

检测波长：220-280nm

柱温：20-40℃

检测器：紫外线检测器或二级管阵列检测器。

作为优选的技术方案：所述流动相中还含有三氟乙酸。

作为优选的技术方案：所述流动相流速为1.0mL/min。

作为优选的技术方案：所述检测波长为280nm。

作为优选的技术方案：所述柱温为30℃。

作为优选的技术方案：溶解供试品的溶剂为乙醇。

作为优选的技术方案：供试品溶液浓度为0.2-1mg/mL，进一步优选为0.2mg/mL。

作为优选的技术方案：单针进样量为5-40μL，进一步优选为20μL。

通过实验证明，AD-H(5μm x 4.6mm x 25cm)手性柱能实现PHBA与其对映异构体很好的分离效果。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明采用手性色谱法的对映体过剩值(即ee值)测定，实现了PHBA与其对映异构体的分离，具有较高的灵敏度和专属性，具有快速、灵敏、操作简便和准确、不需要高纯度单一对映体作为对照物等优点，分离度符合药典规定，即分离度大于1.50，可用于PHBA的质量控制，本方法特别适合就高ee值对映体产物纯度的准确测定。

附图说明

图1是实施例2中液相色谱图；