[发明专利]蓝莓组织培养的再生培养基及培养方法和应用

说明书

本发明属于植物的组织培养技术领域，具体涉及一种蓝莓组织培养的再生培养基及培养方法和应用。本发明提供的蓝莓组织培养的再生培养基，包括初代培养基、增殖培养基和叶片不定芽诱导培养基；初代培养基包括改良WPM培养基、6－BA、蔗糖和植物凝胶，pH为5.2～5.4；增殖培养基包括改良WPM培养基、ZT、蔗糖和植物凝胶，pH为5.2～5.4；叶片不定芽诱导培养基包括改良WPM培养基、TDZ、蔗糖和植物凝胶，pH为5.2～5.4；其中，改良WPM培养基，是将WPM培养基中的CaCl₂·2H₂O替换为糖醇钙。本发明具有针对性强、适应性好，成本低廉的优点，能够有效提高愈伤组织的诱导率和不定芽的分化率。

技术领域

本发明属于植物的组织培养技术领域，尤其涉及一种蓝莓组织培养的再生培养基及培养方法和应用。

背景技术

蓝莓为杜鹃花科越橘属植物，是具有较高的经济价值和广阔开发前景的新兴果树树种。蓝莓果实营养丰富，既可鲜食，也可深加工，低能量且含有多种抗氧化成分，尤其是其抗氧化能力为所有果品蔬菜之首。蓝莓果实不仅具有增强人体免疫力、防癌抗癌的奇特功效、并可以显著降低心血管疾病、糖尿病、帕金森病等的发病率；因此，蓝莓被誉为“黄金浆果”，是联合国粮农组织(FAO)重点推荐的人类五大健康食品之一。

我国蓝莓种植和研究较晚，从20世纪80年代才开始引进种植，但近几年发展呈迅猛态势。随着近来市场对蓝莓的需求量不断增长，传统的扦插、压条等繁殖方法繁殖系数和出苗率低，生根难，繁殖规模受限等缺点，难以满足迅速推广优良品种的需要。采用组织培养方法可以在短期内快速繁殖种苗，不仅繁殖率高，而且可以保持原繁殖母株的优良性状，生产出的苗木质量好，均匀一致，容易脱去病毒，为后期树体生长结果奠定良好的基础，组织培养技术近来来在生产上应用越来越广泛。

在蓝莓组织培养中再生培养基的配方以及外源植株激素的加入至关重要。目前所公开的培养基的配方都是针对不同的品种而言的，并不是一种培养基配方就适合所有的蓝莓初代培养或再生培养。由于蓝莓品种差异对培养基的营养成分需求略有不同，因此通过组织培养方式生产蓝莓种苗时，需依据品种使用不同的培养基。同时，外源植物激素作为生长调节剂对离体外植体的分化存在明显促进作用，不同的植物激素种类及浓度对于离体外植体细胞的分化和不同器官发生起着不同的作用。

目前，对于蓝莓外植体的再生技术尤其是蓝莓叶片离体再生技术的研究并不多，而且还存在着诸多问题。为进一步改良蓝莓品质，建立稳定的、高效的叶片离体再生体系是进行遗传转化的重要基础的前提，有助于对蓝莓进行遗传改良。因此，研究出适宜的蓝莓外植体再生技术中激素种类、浓度配比、再生培养基以及培养条件具有重要的现实意义。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种蓝莓组织培养的再生培养基，具有针对性强、适应性好，成本低廉的优点，能够有效提高愈伤组织的诱导率和不定芽的分化率。

本发明的第二目的在于提供一种蓝莓叶片离体再生的培养方法，该方法通过使用上述的蓝莓组织培养的再生培养基进行蓝莓叶片离体再生的培养，具有操作简便，成本低，诱导效率高，周期短的优点。

本发明的第三目的在于提供一种上述的蓝莓组织培养的再生培养基在培养蓝莓布里吉塔方面的应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

根据本发明的一个方面，本发明提供一种蓝莓组织培养的再生培养基，包括初代培养基、增殖培养基和叶片不定芽诱导培养基；

所述初代培养基包含：改良WPM培养基+0.5～2mg/L 6－BA+15～40g/L蔗糖+5～15g/L植物凝胶，pH为5.2～5.4；

所述增殖培养基包含：改良WPM培养基+0.5～2mg/L ZT+15～40g/L蔗糖+5～15g/L植物凝胶，pH为5.2～5.4；