[发明专利]一种铁皮石斛的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种铁皮石斛的组织培养方法，特别是一种增殖率高的铁皮石斛的组织培养方法。

背景技术

铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。

现代药理学研究表明，铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用，在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面，药理作用显著。其化学成分较复杂，已确定的化合物类型主要有：生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类，其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。石斛碱型倍半萜类生物碱为石斛属植物特有，其中石斛碱是最早发现，研究最多的生物碱；金钗石斛碱与非甾体类抗炎药药理作用相似，具有免疫调节、抗炎、扩张血管等作用。

目前，利用组培技术对铁皮石斛在种质保存和快速繁殖方面已取得一定成就，但优良品种经数次继代或因激素使用不当、培养环境等因素，增殖率及低。

发明内容

本发明的目的，是提供一种铁皮石斛的组织培养方法，本发明方法对铁皮石斛进行组织培养时，增殖率高达358.5％，幼苗长势好。

本发明是这样实现的。

一种铁皮石斛的组织培养方法，取铁皮石斛原球茎，于生根培养基中培养，直至长出1-2片真叶高度为1.5-2.5cm的铁皮石斛幼苗；取高度为1.5-2.5cm、含1-2片真叶的铁皮石斛幼苗，接种于幼苗培养基中，培养50-60天，即得。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述生根培养基按重量份计算主要由黄莲5-15份、白芍10-20份、血竭5-15份、三七10-20份、生姜5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、马铃薯1-5份和黄豆5-15份制成。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述生根培养基按重量份计算，主要由黄莲10份、白芍15份、血竭10份、三七15份、生姜10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、马铃薯3份和黄豆10份制成。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述生根培养基按下述步骤进行制备：

(1)取黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，过滤，滤渣弃去，收集滤液，得A品；

(2)取土豆和马铃薯，加入5-6倍量水，打成浆，得B品；

(3)取黄豆，粉碎成粉末，得C品；

(4)A品、B品混合，加热至50-60℃，加入C品和蛋白胨，搅拌5-10min后，冷却至5-10℃，即得。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述幼苗培养基按重量份计算主要由熟玉米泥10-20份、山药泥10-20份、芋头泥10-20份、琼脂1-5份和中药渣20-30份混匀，即得。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述幼苗培养基按重量份计算，主要由熟玉米泥15份、山药泥15份、芋头泥15份、琼脂3份和中药渣25份混匀，即得。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述中药渣主要由按重量份计算的葛根50-60份、威灵仙30-40份、夏枯草20-30份、合欢皮10-20份、穿心莲1-10份和苍术20-30份按下述方法制备：取葛根、威灵仙、夏枯草、合欢皮、穿心莲和苍术加5-6倍量水，煎煮2-3h，过滤，滤渣干燥，粉碎成粗颗粒，即得。

前述的铁皮石斛的组织培养方法，所述中药渣主要由按重量份计算的葛根55份、威灵仙35份、夏枯草25份、合欢皮15份、穿心莲5份和苍术25份按下述方法制备：取葛根、威灵仙、夏枯草、合欢皮、穿心莲和苍术加5.5倍量水，煎煮2.5h，过滤，滤渣干燥，粉碎成粗颗粒，即得。

申请人对本发明进行了大量的实验研究，部分实验如下：

实验例.

1方法

设置2个处理组，即本发明组和对比组。

本发明组：按实施例1进行组织培养；

对比组：组织培养方法同实施例1，但所述生根培养基中不含黄莲、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，所述幼苗培养基中不含中药渣。

60d后观察，统计组培苗的生长情况。

统计方法：

生长值(cm)＝统计时平均株高-继代时平均株高；

增殖率(％)＝(统计时苗总数一继代时苗总数)/初始苗总数×100％。

2结果