[发明专利]抗辣椒青枯病复合微生物菌剂的生产工艺

说明书

技术领域

本发明属于肥料加工技术领域，具体涉及一种抗辣椒青枯病复合微生物菌剂的生产工艺。

背景技术

辣椒，别名：牛角椒、长辣椒、菜椒、灯笼椒，拉丁文名： Capsicum annuum L.，茄科、辣椒属一年或有限多年生草本植物。茎近无毛或微生柔毛，分枝稍之字形折曲。叶互生，枝顶端节不伸长而成双生或簇生状，矩圆状卵形、卵形或卵状披针形，全缘，顶端短渐尖或急尖，基部狭楔形；花单生，俯垂；花萼杯状，不显著5齿；花冠白色，裂片卵形；花药灰紫色。果梗较粗壮，俯垂；果实长指状，顶端渐尖且常弯曲，未成熟时绿色，成熟后成红色、橙色或紫红色，味辣。种子扁肾形，淡黄色。辣椒是我国家常蔬菜的一种，日常种植量很大。辣椒青枯病是由细菌引起的，是细菌性维管束组织病害。植株发病时，病株顶部叶片白天枯萎，阴天或早晚恢复，2-3天后叶片保持绿色但全株枯萎。切开病茎，导管呈褐色，将切口浸在水中，从切口处流出白色混浊的菌液。茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)是引起辣椒青枯病的主要病菌，现在，植物青枯病已经成为世界范围内的传播广泛、危害严重的重大病害之一。目前，针对辣椒青枯病的防治手段主要是提高辣椒的抗性，实现耕作控制、药剂防治和生物防治等，但由于青枯菌长期存活性和寄主范围多样性，导致至今尚无有效的化学农药和其他防治办法，因此青枯病被称为植物的“癌症”。

化学药剂防治青枯病虽然能起到一定的作用，但是长期大量施用化学药剂容易造成环境污染和辣椒的药剂残留，严重影响人体健康。生物防治由于其对环境、生态和人畜的安全性而受到了国内外研究者的广泛关注，其主要是通过施用拮抗菌、有机肥或生物有机肥等措施调节土壤微生态、改善土壤微生物多样性、抑制病原菌的生长或提高植物自身抗性，从而抑制土传病害的发生。

壳寡糖是由甲壳素脱乙酰基后经过酶解而得到的低聚糖，可作为植物生长调节剂，增强植物对虫害的防御能力，已有研究表明壳寡糖对辣椒花叶病毒病有诱抗效果。

防治辣椒青枯病的研究具有一定的历史，如专利申请号 201010138221.7防治辣椒青辣椒的拮抗菌及其微生物有机肥料，采用自主分离的枯草芽孢杆菌a45添加至有机肥料中，制成生物有机肥来预防辣椒青枯病，但由于菌株单一，没有辅助抗病成分，防治率只有70％；再如申请号201510129796.5一种辣椒青枯病的抗病药物公开的抗病配方，采用了甘草、陈皮等中草药，是对中药资源的一种浪费；又如申请号201510245137.8一种辣椒青枯病的防治法，公开了一种波尔多液配方用来防治辣椒青枯病，但是采用化学试剂较多，容易对土壤造成污染。以上专利除将拮抗菌添加至肥料当中复配外，并无添加壳寡糖这一能提高辣椒抵抗力的有益成分，并且未经粘涂等生产处理，不能达到长效抗病的效果，本发明则能很好地解决这一问题。本发明利用微生物对青枯病菌的拮抗、杀灭作用及壳寡糖对辣椒诱导抗性达到对此病的防治，具有无污染、环境友好、成本低廉、效果持久的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供抗辣椒青枯病复合微生物菌剂的生产工艺。

本发明的目的是通过如下措施来达到的：

a)胶状芽孢杆菌菌体制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，pH7.5,121℃灭菌30min, 接入购买菌种，摇床100～150r/min培养24h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为牛肉膏0.4％、酵母浸出粉0.9％、氯化钠 0.3％,pH7.5，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至36℃时，接入5％菌种液，转速100～150r/min培养24～26h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得胶状芽孢杆菌菌体；

b)哈茨木霉菌制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为无琼脂PDA培养基，25℃接入购买菌种，摇床100～150r/min培养 144h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为蔗糖2％、硝酸铵0.5％、磷酸钠0.2％、硫酸镁0.1％，pH9.0，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至25℃时，接入5％菌种，转速100～150r/min 培养144～192h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得哈茨木霉菌菌体；