[发明专利]抗烟草青枯病复合微生物菌剂的生产工艺

说明书

技术领域

本发明属于肥料加工技术领域，具体涉及一种抗烟草青枯病复合微生物菌剂的生产工艺。

背景技术

烟草在我国是一种重要的农业经济作物，在农业经济中占有较为重要的地位，尤其是一些经济发展相对滞后的地方，是满足人们的基本的生活要求一种基本手段。烟草青枯病是茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的，寄主范围包括200多种作物，其中马铃薯、番茄、烟草等茄科作物受害最为严重，现在，植物青枯病已经成为世界范围内的传播广泛、危害严重的重大病害之一。目前，针对烟草青枯病的防治手段主要是提高烟草的抗性，实现耕作控制、药剂防治和生物防治等，但由于青枯菌长期存活性和寄主范围多样性，导致至今尚无有效的化学农药和其他防治办法，因此青枯病被称为植物的“癌症”。

化学药剂防治青枯病虽然能起到一定的作用，但是长期大量施用化学药剂容易造成环境污染和烟草的药剂残留，严重影响人体健康。生物防治由于其对环境、生态和人畜的安全性而受到了国内外研究者的广泛关注，其主要是通过施用拮抗菌、有机肥或生物有机肥等措施调节土壤微生态、改善土壤微生物多样性、抑制病原菌的生长或提高植物自身抗性，从而抑制土传病害的发生。

壳寡糖是由甲壳素脱乙酰基后经过酶解而得到的低聚糖，可作为植物生长调节剂，增强植物对虫害的防御能力，已有研究表明壳寡糖对烟草花叶病毒病有诱抗效果。

使用微生物防治烟草青枯病具有一定的历史，如专利申请号 201310046171.3防治烟草青枯病拮抗菌及其应用，其使用蜡状芽孢杆菌和黑曲霉对青枯病病菌进行拮抗；专利申请号 201610307739.6一种防治烟草青枯病的青霉xfsf-8菌株及其应用；专利申请号201510010789.3一种防治烟草青枯病的生防放线菌菌株及其应用，该菌株通过产生活性物质抑制烟草青枯病菌的生长，对烟草青枯病表现出较好的防治效果；专利申请号 201610746757.4一种防治烟草青枯病发酵液及其制备方法，此发明通过将不同的生防菌组合后以不同的比例混合发酵，通过浇根的施用方法能有效控制烟草青枯病。以上专利除将拮抗菌进行发酵后复配外，并无添加壳寡糖这一能提高烟草抵抗力的有益成分，并且未经粘涂等生产处理，不能达到长效抗病的效果，本发明则能很好地解决这一问题。本发明利用微生物对青枯病菌的拮抗、杀灭作用及壳寡糖对烟草诱导抗性达到对此病的防治，具有无污染、环境友好、成本低廉、效果持久的优点。

发明内容

本发明的目的在于提供抗烟草青枯病复合微生物菌剂的生产工艺。

本发明的目的是通过如下措施来达到的：

a)胶状芽孢杆菌菌体制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，pH7.5,121℃灭菌30min, 接入购买菌种，摇床100～150r/min培养24h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为牛肉膏0.4％、酵母浸出粉0.9％、氯化钠 0.3％,pH7.5，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至36℃时，接入5％菌种液，转速100～150r/min培养24～26h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得胶状芽孢杆菌菌体；

b)哈茨木霉菌制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为无琼脂PDA培养基，25℃接入购买菌种，摇床100～150r/min培养 144h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为蔗糖2％、硝酸铵0.5％、磷酸钠0.2％、硫酸镁0.1％，pH9.0，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至25℃时，接入5％菌种，转速100～150r/min 培养144～192h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得哈茨木霉菌菌体；

c)细黄链霉菌制备：购买菌种，制备菌种培养基，配方为无琼脂PDA培养基，30℃接入购买菌种，摇床100～150r/min培养 144h，此为菌种液；制备扩增培养基，配方为葡萄糖1％、淀粉2％、黄豆饼粉1.5％、碳酸钙0.3％、磷酸氢二钾0.05％、硫酸铵0.5％、豆油0.5％，pH自然，转入发酵罐进行高温灭菌，灭菌后待温度降低至30℃时，接入5％菌种，转速100～150r/min培养144～192h，转出发酵液4000r/min离心30min，获得细黄链霉菌菌体；

d)配料：称取胶质芽孢杆菌15～20份，哈茨木霉菌15～20 份，细黄链霉菌15～20份，混匀备用；

e)复合菌制粒：使用高速旋转制粒机对混匀的配料进行治粒，加入湿润剂，转速35Hz搅拌制粒，过6目尼龙网后进行沸腾干燥， 45℃干燥至水分为5～8％，获得复合菌颗粒；