[发明专利]用于检测HER2基因的FISH探针、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种用于检测HER2基因的FISH探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

a、提取探针合成模板：利用基因组DNA提取试剂盒提取人类基因组DNA，作为HER2基因以及17号染色体着丝粒区域检测探针合成的模板；

b、第一步PCR反应：采用第一组PCR反应引物，以人体基因组DNA为模板，进行PCR体系的扩增，得到DNA产物；

c、第二步PCR反应：采用第二组PCR反应引物，以与其对应的第一步PCR反应获得的DNA产物为模板进行PCR体系的扩增，得到第二步PCR反应产物；

d、纯化：将第二步PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，采用PCR产物凝胶回收试剂盒进行切胶、回收、纯化，得到检测HER2基因的FISH探针；

所述的第一组PCR反应引物包括HER2基因第一组PCR反应引物和17号染色体着丝粒区域第一组PCR反应引物；

所述的第二组PCR反应引物包括HER2基因第二组PCR反应引物和17号染色体着丝粒区域第二组PCR反应引物。

2.根据权利要求1所述的用于检测HER2基因的FISH探针的制备方法，其特征在于，步骤b第一步PCR反应中包含以下组分：反应引物、模板、2×Es Taq MasterMix。

3.根据权利要求2所述的用于检测HER2基因的FISH探针的制备方法，其特征在于，步骤c第二步PCR反应中包含以下组分：反应引物、模板、dNTP、荧光标记的dUTP、Taq DNA聚合酶、含Mg²⁺的10×Taq酶反应缓冲液。

4.根据权利要求1所述的用于检测HER2基因的FISH探针的制备方法，其特征在于，

所述HER2基因第一组PCR反应引物包括以下15对：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30；

所述HER2基因第二组PCR反应引物包括以下15对：SEQ ID NO.46和SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48和SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.50和SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52和SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.54和SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.56和SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58和SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.60和SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.62和SEQ ID NO.63、SEQ ID NO.64和SEQ ID NO.65、SEQ ID NO.66和SEQ ID NO.67、SEQ ID NO.68和SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.70和SEQ ID NO.71、SEQ ID NO.72和SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.74和SEQ ID NO.75。