[发明专利]一种fruC基因过表达的重组梭菌、其构建方法及应用有效
| 申请号： | 201710338981.4 | 申请日： | 2017-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN107245096B | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 陈丽杰;徐飞;薛闯;白凤武 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C07K14/33 | 分类号： | C07K14/33;C12N15/31;C12N1/21;C12N15/75;C12N15/66;C12P7/16;C12R1/145 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 刘慧娟;李馨 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 fruc 基因 表达 重组 构建 方法 应用 | ||
1.一种高效生产丁醇的重组梭菌，其特征在于，含有fruC基因，且所述fruC基因在梭菌内过表达；所述fruC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重组梭菌选自丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)。
2.根据权利要求1所述的高效生产丁醇的重组梭菌，其特征在于，还含有核苷酸序列为SEQ ID NO.3的硫解酶的启动子。
3.权利要求1所述的重组梭菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)fruC基因过表达重组质粒的构建：将核苷酸序列为SEQ ID NO.3的硫解酶的启动子Pthl序列经Pst I和SalI酶切后与pIMP1质粒连接，得到载体质粒pIMP1-Pthl，以丙酮丁醇梭菌C .acetobutylicum ATCC 824基因组作为模板，利用PCR扩增核苷酸序列为SEQ IDNO.1的fruC基因，再将其与pIMP1-Pthl质粒进行连接从而构建pIMP1- Pthl- fruC质粒；
(2)过表达重组质粒甲基化：将重组质粒转入E .coli DH10B(pAN1)中进行甲基化，得到甲基化质粒pIMP1-Pthl-fruC；
(3) fruC基因过表达重组菌株的构建：通过电转化法，将步骤(2)所得甲基化质粒pIMP1-Pthl-fruC转化至丙酮丁醇梭菌C .acetobutylicum ATCC 824中，通过涂布于含有红霉素抗性的TGY琼脂培养基上，培养、筛选获得含有甲基化质粒pIMP1-Pthl-fruC的fruC基因过表达重组梭菌。
4.权利要求1所述的重组梭菌在生产丁醇中的应用，其特征在于，所述重组梭菌能提高丁醇发酵果糖、葡萄糖与果糖的混合糖以及菊芋水解液的利用率，以及提高丁醇产量。
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