[发明专利]一种专用于样品制备的等电聚焦电泳预制胶片

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术分离检测设备领域，具体为用于样品制备的等电聚焦电泳预制胶片。

背景技术

双向凝胶电泳(Two-dimensional electrophoresis，2DE)技术作为蛋白质研究的重要手段，其重要地位在短期内仍然不可动摇。O’Farrell和Klose在1975年分别独立提出来，并成为现代2DE的基础，其原理是：第一维进行等电聚焦，根据等电点分离蛋白质，第二维在十二烷基硫酸钠(SDS)及还原剂的存在下进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，按照蛋白质分子的大小(正比于分子量)进行分离。

作为2DE技术中关键的一环，等电聚焦是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。该技术利用特殊的两性电解质缓冲液在凝胶(常用聚丙烯酰胺凝胶)内制造一个pH梯度，电泳时每种蛋白质将迁移至与其等电点(pI)相同的pH处(此时该蛋白质净电荷为0)，形成一个很窄的区带。在早期，人们使用在电解池中加入载体两性电解质，通直流电后，载体就根据各自等电点的不同而移动，并逐渐形成一个由阳极到阴极pH值逐渐增加的pH梯度。但是随着聚焦时间的延长，pH梯度不稳，易产生阴极漂移。另外，早期的IEF(等电聚焦)实验操作十分繁琐，重现性差。由于其本身多年来在技术上的进步，其中主要是固定化pH梯度(IPG，immobilized pH gradient)的发明和改进，IEF技术得到广泛应用。IPG的发明大大提高了IEF的重现性，并能够增加上样量，从而改善灵敏度。

以IEF为核心的2DE也存在如下缺陷：有限的动态范围；分离样品中大小差别较大的蛋白、低丰度蛋白(如信号蛋白和转录因子)以及疏水蛋白(膜结合蛋白和跨膜蛋白)的能力有限；现今市场上干胶条在使用前需要进行12小时左右的水化，包括水化缓冲液的配置等步骤，操作过程费时费力，且水化过程存在溶胀不充分，胶条损坏，出现气泡等风险，严重影响等电聚焦结果；样品数量较多时，低的上样量严重影响后续实验的进度，多批次的样品处理增大了批次间的差异性，实验结果可信度降低。

针对上述问题，本发明提出一种专用于样品制备的等电聚焦电泳预制胶片，该装置结构简单、实用、操作方便，大大提高了样品处理量、降低了操作难度。

发明内容

一种专用于样品制备的等电聚焦电泳预制胶片，如图1，该预制胶片包括：前板1、pH梯度凝胶2、梳子3、封口黏膜4、后板5、垂直边条6，前板1放置在后板5上，并用封口黏膜4将前板1、后板5的一端封合，pH梯度凝胶2位于由玻璃材质的前板1下表面、后板5上表面围成的玻璃板层间隙中，梳子3置于与封口黏膜4相对应的另一端，其中pH梯度凝胶2为凝胶片且该预制胶片为整体性结构。

首先，凝胶片的体积远大于胶条，可同时进行多种样品、高上样量的电泳实验；其次，该整体性的预制胶片将pH梯度凝胶与玻璃板结合，创新地将2DE中第一维IEF和第二维PAGE特点有机融合，实现了2DE在新形势下实验技术的升华，其中等电聚焦电泳预制胶片尺寸与小型、中型及大型垂直电泳槽匹配，为广大实验工作者提供了又一技术工具；另外，上述制备型等电聚焦电泳预制胶片可在常规的垂直电泳槽中使用，操作十分简单，而不需像同类产品需要专门购买特定的昂贵仪器，预制胶片无干胶条的水化过程，避免了复杂的操作过程，可直接将整体性结构的预制胶片用于实验。

优选的，所述梳子3为平头梳。只有一种样品需要进行等电聚焦时，使用平头梳，可大大增加上样量，减少总样品的电泳实验批次，缩短电泳周期；

优选的，所述梳子3为一至多孔梳。样品种类较多时，使用多孔梳，且可根据样品种类的数量选择相应孔数的梳子，进行同步多样品的等电聚焦，减少样品处理批次，加快实验进程，也有效降低多批次处理样品过程中由于电泳环境改变导致各批次实验结果的差异，实验结果的可对比度得到改善。

优选的，所述垂直边条是玻璃垂直边条或塑料垂直边条。

优选的，所述垂直边条厚度为0.1mm～2mm。垂直边条的厚度越大，相应的玻璃板层间的间隙厚度越大，可容纳的pH梯度凝胶2的厚度变大，可根据对不同pH梯度凝胶2的厚度需求灵活改变垂直边条的厚度。

优选的，所述前板厚度为0.1mm～6mm。

优选的，所述后板厚度为0.1mm～6mm。