[发明专利]一种分离的内源性抗菌多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种分离的内源性抗菌多肽及其应用，该多肽对小肠结肠炎耶尔森菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有显著抑菌效果，通过电镜扫描发现其主要通过破坏细菌细胞膜的完整性从而抑制细菌，利用该多肽可制备抗小肠结肠炎耶尔森菌、抗大肠杆菌、抗金黄色葡萄球菌的药物。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体地说涉及一种分离的内源性抗菌多肽及其应用。

背景技术

自1939年第一种抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)从土壤芽孢杆菌中被分离以来，在不同生物中陆续发现了2490多种抗菌肽，并且新的抗菌肽还在不断地开发和鉴定中。抗菌肽是一类由5～100个氨基酸组成的寡肽，具有广谱的抗菌活性，作用靶标包括革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、真菌、病毒、寄生虫以及肿瘤细胞等，使它迅速成为潜在的治疗药物。

抗菌肽的杀菌机制包括通过破坏细胞膜的完整性，抑制蛋白、DNA和RNA的合成，或与胞内某些特定的靶标相结合从而杀死细菌。一般来说，一种抗菌肽仅对一类微生物有效，但是也有一些例外的抗菌肽针对不同的微生物具有不同的杀伤机制，例如抗菌肽indolicidin不仅可以通过渗透细胞抑制DNA的合成杀伤大肠杆菌，而且可以通过损伤真菌细胞膜杀伤真菌，还可以抑制HIV-整合酶抑制HIV活性。还有一些抗菌肽对不同类型微生物具有相同的杀伤模式，PMAP-23能够在细胞膜形成孔隙杀死真菌和寄生虫。抗菌肽不仅可以破坏微生物细胞膜而且可以抑制功能蛋白的合成产生快速杀伤效应的独特机制使其成为理想的抗生素替代品。耐药菌、生物被膜、滞留菌对传统抗生素具有很强的抗性，并且它们在感染中发挥着重要作用。利用抗菌肽破坏细胞膜的效应杀死耐药菌以及对生物被膜基质蛋白酶的作用清除生物被膜，可以有效控制感染的发生，因此具有潜在的开发应用价值。

由于治疗感染的抗生素有效性的降低，使得越来越多的感染性疾病如肺炎、结核病等变得更难治疗。2017年2月27日，世界卫生组织(WHO)发布了迫切需要新型抗生素的细菌清单，该清单强调了抗生素耐药菌的威胁性问题以及对新型抗生素需求的迫切性。与抗生素类和小分子药物相比，多肽类药物不仅具有广谱的抗菌活性，不易产生耐药性，而且具有活性强、毒性低、免疫原性小等独特的优势，受到越来越多的关注，Lloyd Czaplewsk等人更是将抗真肽列为抗生素最理想的替代物。母乳中除富含蛋白质外，还有丰富的多肽，是含量丰富的天然肽库之一。近年来，研究发现母乳中含有超过300种内源性多肽，如母乳β-防御素-2(hBD2)的和人乳铁蛋白来源的短hLF(1-11)被证实具有广谱的抗菌活性，且无耐受性和毒副作用，展现出母乳内源性多肽作为抗菌药物的良好潜质。因此，从母乳内源性多肽的角度进一步寻找抗菌肽将会给临床抗感染带来新的治疗手段。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种分离的内源性抗菌多肽，本发明还有一个目的是提供编码前述多肽的核苷酸，本发明还有一个目的是提供含有前述核苷酸序列的表达载体；本发明还有一个目的是提供前述表达载体转染的宿主细胞；本发明还有一个目的是提供含有前述多肽的组合物；本发明还有一个目的是提供前述多肽在制备抗小肠结肠炎耶尔森菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌药物上的应用。

技术方案：本发明所述的一种分离的内源性抗菌多肽，其通式为：

X-Val-Thr-Gln-Pro-Leu-Ala-Pro-Val-His-Asn-Pro-Ile-Ser-Y

其中，X为NH₂-或Tyr-Pro-；Y为-Val或-OH。

本发明所述的内源性的抗菌多肽来源于人类母乳中的β-酪蛋白，其含有氨基酸序列Val-Thr-Gln-Pro-Leu-Ala-Pro-Val-His-Asn-Pro-Ile-Ser，在该序列的氨基酸和/或羧基端添加特殊小分子基团后，其具备更优秀的抑菌效果。

具体地说，所述内源性抗菌多肽选自如下序列的任意一种：