[发明专利]一种本土群体感应淬灭细菌的筛选方法及其应用

权利要求书

1.一种本土群体感应淬灭菌筛选方法，包括以下步骤：

从本土实验室小试MBR装置反应池中获取的活性污泥接种在浓度为2mM的C6-AHL作为唯一碳源的的基本培养基上，经过5天富集培养后，按体积比取1％样品转移到新的含有C6-AHL基本培养基中进行培养，重复执行前述步骤3次；

挑取适量培养完成后的菌液在LB固体培养基上划线培养，于30℃恒温培养10-14小时，重复执行前述步骤2-3次以纯化菌落后，挑取单菌落保存。

2.一种如权利要求1所述的群体感应淬灭菌的用途，其特征在于，用所述细菌降解活性污泥中的N-酰基高丝氨酸内酯，所述N-酰基高丝氨酸内酯包括C8-HSL和C6-HSL。

3.一种如权利要求1所述的群体感应淬灭菌的用途，其特征在于，用特定材料包埋所述细菌制成饺子状菌包，并用所述菌包降解活性污泥中的N-酰基高丝氨酸内酯，所述特定材料为PVDF平板膜，所述高丝氨酸内酯包括C8-HSL和C6-HSL。

4.一种如权利要求3所述的群体感应淬灭菌菌包，其制备过程包括以下步骤：

对所述菌株挑取菌落接种到LB液体培养基中，以30℃恒温培养10-14小时，取混合液离心后用生理盐水反复清洗离心细菌后，弃去上清液，称取0.1g细菌(湿重)，用PVDF平板膜将细菌包埋，用环氧树脂将平板膜封口放置在空气中固化使其成为饺子状菌包。

5.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述步骤具体包括：

挑取所述群体感应淬灭细菌菌落，接种到LB液体培养基中过夜培养，以30℃恒温培养10-14小时，取混合液离心后用生理盐水反复清洗离心细菌后，用超纯水将细菌稀释成OD600＝1.0的菌液；

将所述菌液以100:1的比例与C6-AHL和C8-HSL混合，使混合液中的C6-AHL和C8-HSL最终浓度均为100ng/mL，混合液在30℃恒温震荡培养箱中以120rpm的条件震荡，并分别于10min,20min,60min和120min时间点取样,用三重四级杆串联质谱仪测定所述样品中剩余的C6-AHL和C8-HSL浓度。

6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述步骤具体包括：

将前述步骤中菌包投加到浓度均为100ng/mL的C6-AHL和C8-HSL混合溶液中，溶液在30℃恒温震荡培养箱中以120rpm的条件震荡，并分别于5min，10min，30min，60min，120min和300min时间点取样，用三重四级杆串联质谱仪测定所述样品中剩余的C6-AHL和C8-HSL浓度；

将前述步骤中的菌包投加到浓度均为100ng/mL的C6-AHL和C8-HSL混合溶液中，溶液分别在20℃，30℃和40℃的恒温震荡箱中以120rpm的条件震荡，并分别在300min时间点取样，用三重四级杆串联质谱仪测定所述样品中剩余的C6-AHL和C8-HSL混合浓度。