[发明专利]大豆蛋白及其编码基因的应用及引物、表达载体和制备方法有效
| 申请号： | 201710343021.7 | 申请日： | 2017-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN107119004B | 公开（公告）日： | 2020-08-18 |
| 发明（设计）人： | 刘昀;吴佳辉;郑易之;程华;孙楠;谭芳美 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/29;C12N15/70;C12N15/11;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/54;C12R1/19 |
| 代理公司： | 深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙) 44312 | 代理人： | 王利彬 |
| 地址： | 518000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大豆蛋白 及其 编码 基因 应用 引物 表达 载体 制备 方法 | ||
1.一种大豆蛋白的应用，其特征在于，所述大豆蛋白的基因编码为Glyma11g07260.1，将所述大豆蛋白用于提高大肠杆菌的耐盐性。
2.一种大豆蛋白的编码基因的应用，其特征在于，所述大豆蛋白的基因编码为Glyma11g07260.1，将所述大豆蛋白的编码基因用于提高大肠杆菌的耐盐性。
3.根据权利要求2所述的大豆蛋白的编码基因的应用，其特征在于，所述大豆蛋白的基因编码为Glyma11g07260.1，引物的序列如下所示：
F：3’-ATGTTTCACTCAATCAAAACGG(Nde I)-5’；
R：3’-TTAATTGGCGCTGGTCTGGTG(Xho I)-5’。
4.根据权利要求2所述的大豆蛋白的编码基因的应用，其特征在于，表达载体为携带有SEQ ID NO.4所示的大豆蛋白基因，用于表达基因编码为Glyma11g07260.1的大豆蛋白。
5.根据权利要求4所述大豆蛋白的编码基因的应用，其特征在于，所述表达载体用PET-28a蛋白表达载体重组得到，该大豆蛋白基因通过酶切位点Nde I和Xho I连接在表达载体上。
6.根据权利要求2所述的大豆蛋白的编码基因的应用，其特征在于，所述表达载体的制备方法包括以下步骤：
扩增目的基因：以F：3’-ATGTTTCACTCAATCAAAAC GG-5’；R：3’-TTAATTGGCGCTGGTCTGGTG-5’作为引物，以大豆R0期胚根cDNA为模板，进行PCR扩增，得到目的基因片段，目的基因片段的基因序列如SEQ ID NO.4所示；
构建重组质粒：将目的基因片段与经Nde I和Xho I双酶切的蛋白表达载体PET-28a，通过T4连接酶连接酶切产物，构建pET-28a重组质粒。
7.根据权利要求6所述大豆蛋白的编码基因的应用，其特征在于，构建重组质粒过程中，包括以下步骤：
将目的基因片段和经过双酶切的PET-28a蛋白表达载体按照摩尔比10:1混合，加入0.5μL T4连接酶，1μL 10×Buffer，用水补齐至10μL，16℃连接过夜。
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