[发明专利]茶叶悬浮单细胞的分离培养方法

权利要求书

1.茶叶悬浮单细胞的分离培养方法，其特征在于，对冬季采摘的外植体叶片进行诱导，通过外植体组织培养，获得愈伤组织，然后对所述愈伤组织进行继代培养，然后再对继代培养后的愈伤组织进行悬浮培养后经分离获得茶叶悬浮单细胞；

所述外植体培养的愈伤组织培养基为：MS+2.0mg/L的2,4-D+0.5mg/L的KT+ 0.5mg/L的6-BA + 蔗糖30g/L + 琼脂6.5-7.0g/L，pH 5.8；

所述继代培养基为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT+蔗糖30g/L+琼脂6.5-7.0g/L，pH5.8；

继代培养后的愈伤组织经25℃恒温摇床中，添加果胶酶后避光悬浮培养5-10天，将悬浮细胞转入新配制的悬浮培养基中再继代培养培养21-28天；再经2-3次悬浮继代培养后，得到茶叶悬浮单细胞；

所述果胶酶需经过0.22μm无菌滤膜处理，所述果胶酶添加量为液体培养基溶液体积的3％-5％。

2.根据权利要求1所述的茶叶悬浮单细胞的分离培养方法，其特征在于，所述外植体为茶树新稍上部幼嫩叶片。

3.根据权利要求1所述的茶叶悬浮单细胞的分离培养方法，其特征在于，悬浮培养的培养基为B5+1.0mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT+蔗糖20g/L。

4.根据权利要求2所述的茶叶悬浮单细胞的分离培养方法，其特征在于，所述外植体包括预处理，具体是指将采摘后幼嫩叶片流水冲洗1h，50％多菌灵溶液冲洗浸泡4h，2.0g/L的PVPP溶液浸泡1h，清水清洗3-4遍，然后将漂洗干净的叶片用75％乙醇消毒10秒，无菌水冲洗1次，0.1％升汞消毒10分钟，无菌水冲洗3次后用无菌吸水纸吸干叶表水。