[发明专利]一种干细胞提取物及其制备方法与在制备皮肤创面修复制剂中的应用

权利要求书

1.一种干细胞提取物的制备方法，其特征在于，包括：

步骤1：干细胞体外培养4d后，以含有10ng/mL IL-6和0.1vol%胎牛血清的HBSS缓冲液刺激培养2h，弃掉上清液，加入HBSS缓冲液培养2d然后收集细胞培养的上清液；

步骤2：所述上清液经过滤后，滤液与PEG溶液A混合，经离心收集沉淀；

步骤3：步骤2所述沉淀与PEG溶液B混合，经离心，沉淀以PBS溶液重悬后，经冻干制得提取物；

所述干细胞选自表皮干细胞，间充质干细胞或多能诱导干细胞；

步骤2中所述PEG溶液A中的PEG为PEG6000，PEG的质量分数为8%；

步骤3中所述PEG溶液B中的PEG为PEG6000，PEG的质量分数为6%。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冻干的程序包括：

预冻阶段：温度从20℃降至-50℃，维持-50℃ 30 min ~60min；

升华阶段：压力为0.15 mbar~0.22mbar，两次升华：

第一次升华90min，期间温度从-40℃升至-15℃；

第二次升华120min，期间温度从-15℃升至0℃；

解析阶段：压力为0.16 mbar~0.22mbar，时间为40min，期间温度从0℃升至30℃，随后30℃维持200 min。

3.权利要求1或2所述制备方法制得的干细胞提取物。

4.根据权利要求3所述的干细胞提取物，其特征在于，包括如下质量份的：

EGF 10×10³ 份 ~30×10³ 份；

FGF23 30份~75份；

VEGF 0.2 份~0.9份；

PDGF 10 份 ~60份；

KGF 1份~8份；

FIBRONECTIN 10份~50份。

5.根据权利要求4所述的干细胞提取物，其特征在于，包括如下质量份的：

EGF 30×10³ 份；

FGF23 30份；

VEGF 0.9份；

PDGF 10份；

KGF 8份；

FIBRONECTIN 10份。

6.根据权利要求4所述的干细胞提取物，其特征在于，包括如下质量份的：

EGF 10×10³ 份；

FGF23 75份；

VEGF 0.2份；

PDGF 60 份；

KGF 1份；

FIBRONECTIN 50份。

7.根据权利要求4所述的干细胞提取物，其特征在于，包括如下质量份的：

EGF 20×10³ 份；

FGF23 50份；

VEGF 0.5份；

PDGF 32 份；

KGF 2.5份；

FIBRONECTIN 21份。

8.权利要求1或2所述制备方法制得的干细胞提取物，或权利要求3~7任一项所述的干细胞提取物在制备皮肤创面修复制剂中的应用。

9.一种皮肤创面修复制剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述制备方法制得的干细胞提取物，或权利要求3~7任一项所述的干细胞提取物。