[发明专利]提高DNB双末端测序质量的方法和DNB双末端测序方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201710349201.6 | 申请日： | 2017-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN108070642B | 公开（公告）日： | 2020-10-27 |
| 发明（设计）人： | 龚梅花;王静静;罗银铃;罗宇芬;李长英;陈奥;徐崇钧;章文蔚 | 申请（专利权）人： | 深圳华大智造科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518083 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 dnb 末端 质量 方法 试剂盒 | ||
1.一种提高DNB双末端测序质量的方法，其特征在于，所述方法包括：对DNA纳米球进行一链合成测序时，使用部分dUTP代替dTTP进行联合探针锚定聚合测序；在所述一链合成测序完成后，使用USER酶消化一链上的尿嘧啶，然后使用变性剂洗脱一链或使用外切酶消化一链。
2.根据权利要求1所述的提高DNB双末端测序质量的方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的1％～99％。
3.根据权利要求2所述的提高DNB双末端测序质量的方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的50％～75％。
4.根据权利要求3所述的提高DNB双末端测序质量的方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的50％。
5.根据权利要求1-4任一项所述的提高DNB双末端测序质量的方法，其特征在于，所述变性剂是甲酰胺。
6.一种DNB双末端测序方法，其特征在于，所述方法包括：
对DNA纳米球进行一链合成测序时，先杂交一链测序引物，然后在dNTP混合物中引入部分dUTP代替dTTP进行联合探针锚定聚合测序，使得一链部分dTTP位点被dUTP取代；
在所述一链合成测序完成后，使用USER酶消化一链上的尿嘧啶，产生部分核苷酸缺口，使得一链片段化；
然后使用变性剂洗脱一链或使用外切酶消化一链，并通过检测信号来确保一链完全去除；
最后通过聚合和链置换的作用生成二链，从而进行双末端测序。
7.根据权利要求6所述的DNB双末端测序方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的1％～99％。
8.根据权利要求7所述的DNB双末端测序方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的50％～75％。
9.根据权利要求8所述的DNB双末端测序方法，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的50％。
10.根据权利要求6-9任一项所述的DNB双末端测序方法，其特征在于，所述变性剂是甲酰胺。
11.一种DNB双末端测序所使用的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：用于制备DNA纳米球的试剂成分、一链测序引物、至少包括dUTP在内的dNTP、USER酶、聚合酶、变性剂或外切酶中的至少一种，以及说明书，其中所述说明书包括DNB双末端测序方法；
所述方法包括：对DNA纳米球进行一链合成测序时，先杂交一链测序引物，然后在dNTP混合物中引入部分dUTP代替dTTP进行联合探针锚定聚合测序，使得一链部分dTTP位点被dUTP取代；在所述一链合成测序完成后，使用USER酶消化一链上的尿嘧啶，产生部分核苷酸缺口，使得一链片段化；然后使用变性剂洗脱一链或使用外切酶消化一链，并通过检测信号来确保一链完全去除；最后通过聚合和链置换的作用生成二链，从而进行双末端测序。
12.根据权利要求11所述的DNB双末端测序所使用的试剂盒，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的1％～99％。
13.根据权利要求12所述的DNB双末端测序所使用的试剂盒，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的50％～75％。
14.根据权利要求13所述的DNB双末端测序所使用的试剂盒，其特征在于，所述dUTP占dUTP和dTTP总量的50％。
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