[发明专利]禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法

权利要求书

1.一种禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法，其特征在于通过测定混合感染病毒的TCID₅₀进行终点稀释，采用稀释后的病毒液接种DF-1细胞，收集上清与细胞培养物并用分型鉴定引物与IFA的对其进行鉴定，从而获得单一亚型的禽白血病病毒。

2.根据权利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法，其特征在于：所述分型鉴定引物包括ALV-A引物对、ALV-B引物对、ALV-J引物对，它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的碱基序列。

3.根据权利要求2所述的禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法，其特征在于按以下步骤操作进行：

(1)获得混合感染病毒在DF-1增殖3代，第3代通过接种DF-1细胞，随后通过检测ALV-p27抗原并按照Reed-Muench方法测得病毒TCID₅₀；

(2)病毒液以测定TCID₅₀进行终点稀释，稀释后病毒液以24孔板复孔作用于单层DF-1细胞2h，随后换液维持培养至9天；

(3)收集细胞培养物上清并分别编号保存于-80℃，细胞培养物收集抽取DNA并用分型引物鉴定；

(4)鉴定为单一亚型病毒感染的对应孔细胞上清接种DF-1细胞增殖3代进行IFA分型鉴定。

4.根据权利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法，其特征在于步骤(1)所述检测ALV-p27抗原采用IDEXX ALV-p27试剂盒。

5.根据权利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法，其特征在于步骤(2)所述稀释采用的稀释液为Gibco生产DMEM。

6.根据权利要求1所述的禽白血病病毒混合感染中单一病毒的纯化方法，其特征在于步骤(2)所述维持培养采用的培养液为含1％FBS的DMEM。