[发明专利]一种快速鉴别中药材僵蚕中白僵菌真伪的分子鉴定方法有效
| 申请号： | 201710354083.8 | 申请日： | 2017-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN107164471B | 公开（公告）日： | 2020-08-07 |
| 发明（设计）人： | 刘吉平;刘健霞;陈杰湖;李香霖;何青;李峙贤;刘希;吕思行;米红霞 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 任重 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 鉴别 中药材 僵蚕 中白僵菌 真伪 分子 鉴定 方法 | ||
1.一组鉴定验证僵蚕中白僵菌真伪的引物组，其特征在于，为引物对F935和R1385，序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
2.权利要求1所述引物组在鉴定验证僵蚕中白僵菌真伪中的应用。
3.权利要求1所述引物组在构建快速鉴别中药材僵蚕中白僵菌真伪的分子鉴定方法中的应用。
4.权利要求1所述引物组在制备快速鉴别中药材僵蚕中白僵菌真伪的试剂盒中的应用。
5.一种快速鉴别中药材僵蚕中白僵菌真伪的分子鉴定方法，其特征在于，以待测中药材白僵蚕总DNA为模板，利用权利要求1所述引物组F935/R1385进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据PCR扩增结果有无清晰的500bp目的电泳条带来判断待测中药材白僵蚕样品中是否含有白僵菌。
6.根据权利要求5所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述白僵蚕总DNA的提取方法为：先将白僵蚕预处理成粉末后，进行总DNA提取；所述预处理是指：用65～75％乙醇擦拭白僵蚕表面后，放于30～40℃环境中使酒精挥发，再粉碎磨粉。
7.根据权利要求5所述的分子鉴定方法，其特征在于，所述PCR的反应体系为：2xTaqMaster Mix 25μl，10pmol/μL的上下游引物各1μl，DNA模板1μl，ddH2O 2μl；
所述PCR的反应条件：94℃5min；94℃30s，44℃30s，72℃45s，25个循环；72℃10min。
8.根据权利要求5所述的分子鉴定方法，其特征在于，还可进一步继续对PCR扩增产物进行测序及数据对比，构建系统进化树，进一步确定结果。
9.一种快速鉴别中药材僵蚕中白僵菌真伪的试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1所述的引物对F935和R1385。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，还包含有以待测中药材白僵蚕总DNA为模板，利用引物组F935/R1385进行PCR扩增所需的试剂。
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