[发明专利]基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法

权利要求书

1.一种基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法，该方法不包括疾病的诊断和治疗方法，其特征在于它由下述步骤组成：

（1）设计合成探针SH-DNA和探针Acrydite-DNA

根据目标MicroRNA的碱基序列，分别设计合成与目标MicroRNA中8～13个碱基序列互补的探针SH-DNA和探针Acrydite-DNA，其中探针SH-DNA的3’端修饰巯基，探针Acrydite-DNA的5’端修饰丙烯酰胺基，且这两条探针的碱基数目相差0～3个；当探针SH-DNA和探针Acrydite-DNA与目标MicroRNA互补后，探针SH-DNA的5′端和探针Acrydite-DNA的3′端相互毗邻，且这两条探针与目标MicroRNA互补的碱基数目之和与目标MicroRNA的碱基数目相同，同时探针SH-DNA的3’端和探针Acrydite-DNA的5’端分别带有3～5个与目标MicroRNA互补的碱基相毗邻的碱基T；

（2）巯基标记金磁微粒

将探针SH-DNA用磷酸三氯乙酯活化，活化后的SH-DNA与金磁微粒结合，得到巯基标记的金磁微粒；

（3）合成DNA功能化的水溶性荧光聚合物

以过硫酸铵和N,N,N’,N’-四甲基乙二胺的混合物为引发剂，将丙烯酰胺、丙烯酰基荧光素、探针Acrydite-DNA进行无规共聚，得到DNA功能化的水溶性荧光聚合物；

（4）荧光检测目标MicroRNA

将步骤（2）得到的巯基标记的金磁微粒和步骤（3）得到的DNA功能化的水溶性荧光聚合物与不同浓度的目标MicroRNA标准样品进行杂交反应，经磁分离得到杂交产物，对杂交产物经去杂交、磁分离后所得到的上清液进行荧光检测，绘制荧光强度随目标MicroRNA标准样品浓度变化的标准曲线；按照该步骤检测待测MicroRNA样品的荧光强度，结合绘制的标准曲线的线性方程，即可实现对MicroRNA的定性和定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法，其特征在于：在步骤（3）中，所述丙烯酰胺、丙烯酰基荧光素、探针Acrydite-DNA的摩尔比为10000:1000:1。

3.根据权利要求1所述的基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法，其特征在于：在步骤（4）中，所述杂交反应的温度为30～40 ℃，杂交时间为60～120分钟。

4.根据权利要求1所述的基于水溶性荧光聚合物快速灵敏检测MicroRNA的方法，其特征在于：在步骤（4）中，所述荧光检测的激发波长为494 nm、发射波长为512 nm。