[发明专利]一种检测CALR基因1型突变的引物组合物及试剂盒有效
申请号: | 201710363814.5 | 申请日: | 2017-05-22 |
公开(公告)号: | CN107164473B | 公开(公告)日: | 2020-08-25 |
发明(设计)人: | 关明;曹国君;方雪恩;唐宜桂;许笑;孔继烈;张心菊;李杨 | 申请(专利权)人: | 复旦大学附属华山医院;复旦大学;上海速创诊断产品有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6886 | 分类号: | C12Q1/6886;C12N15/11 |
代理公司: | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人: | 竺路玲 |
地址: | 200040 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 calr 基因 突变 引物 组合 试剂盒 | ||
1.一种检测CALR基因1型突变的引物组合物,其特征在于,包括SEQ ID NO:2-SEQ IDNO:7所示序列的引物;
所述引物组合物还包括如SEQ ID NO:8所示序列的PNA探针,其3'末端加了2个赖氨酸。
2.一种含有权利要求1所述的引物组合物的检测CALR基因1型突变的试剂盒。
3.根据权利要求2所述的检测CALR基因1型突变的试剂盒,其特征在于,还包括反应缓冲液、Bst DNA 聚合酶、钙黄绿素、去离子水。
4.一种用于非诊断和非治疗目的的检测CALR基因1型突变的方法,其特征在于,以被测样本的DNA模板,采用如权利要求1所述的引物组合物进行LAMP反应,然后进行可视化判读来鉴定样本是否为CALR基因1型突变阳性。
5.根据权利要求4所述的检测CALR基因1型突变的方法,其特征在于,所述LAMP反应的条件为:58℃-68℃,60min。
6.根据权利要求4所述的检测CALR基因1型突变的方法,其特征在于,所述LAMP反应的体系包括:2×反应缓冲液 12.5μL,SEQ ID NO:2~SEQ ID NO:7所示序列中的每一引物各1μL,SEQ ID NO:8所示序列的PNA探针1μL,Bst DNA 聚合酶1μL,钙黄绿素 1μL,去离子水1.5μL,DNA模板2μL。
7.根据权利要求6所述的检测CALR基因1型突变的方法,其特征在于,SEQ ID NO:2~SEQ ID NO:3所示序列中的每一引物的终浓度均为0.2μmol/L;
SEQ ID NO:4~ SEQ ID NO:5所示序列中的每一引物的终浓度均为1.6μmol/L;
SEQ ID NO:6~ SEQ ID NO:7所示序列中的每一引物的终浓度均为1.6μmol/L;
SEQ ID NO:8所示序列的PNA探针的终浓度为0.8μmol/L。
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