[发明专利]两种抗HER2抗体-毛壳素偶联物及其制备方法和抗肿瘤应用

权利要求书

1.一种具有以下结构式的抗HER2抗体-毛壳素偶联物Trastuzumab-vc-Chaetocin，即T-L-C：

其中，抗HER2抗体为曲妥珠单抗Trastuzumab，Trastuzumab经蛋白酶敏感型缬氨酸-瓜氨酸连接基vc与毛壳素(+)-Chaetocin连接，式中的n代表药物抗体偶联比，n的范围为1-2。

2.一种具有以下结构式的抗HER2抗体-毛壳素偶联物Pertuzumab-vc-Chaetocin，即P-L-C：

其中，抗HER2抗体为帕妥珠单抗Pertuzumab，Pertuzumab经蛋白酶敏感型缬氨酸-瓜氨酸连接基vc与毛壳素(+)-Chaetocin连接，式中的n代表药物抗体偶联比，n的范围为1-2。

3.一种如权利要求1或2所述的抗HER2抗体-毛壳素偶联物的制备方法，包括以下步骤：

(a)利用Sephadex G-25脱盐柱将曲妥珠单抗或帕妥珠单抗原液置换为磷酸盐反应缓冲液，超滤管浓缩调整抗体浓度，制备曲妥珠单抗或帕妥珠单抗；

(b)向单抗缓冲液中加入TCEP，进行还原反应；所述缓冲液为pH 7.4的PBS缓冲液；TCEP与单抗的摩尔比为12:1；所述还原反应的条件为：37℃水浴反应1.5h；

(c)过Sephadex G-25脱盐柱纯化被还原的单抗，加入带连接基的毛壳素(+)-Chaetocin混合，进行偶联反应；所述连接基为马来酰亚胺修饰的缬氨酸-瓜氨酸二肽；带连接基的毛壳素(+)-Chaetocin与单抗的摩尔比为10:1，所述偶联反应的温度为冰浴反应1.5h；

(d)反应完成后，加入半胱氨酸溶液淬灭反应，过脱盐柱纯化，超滤管浓缩得到所述抗HER2抗体-毛壳素偶联物；所述加入的半胱氨酸为20倍过量摩尔比的20mM溶液，淬灭反应为冰浴下45min。

4.根据权利要求3所述的抗HER2抗体-毛壳素偶联物的制备方法，其特征在于，步骤(c)中，所述带连接基的毛壳素(+)-Chaetocin的制备包括以下步骤：

(A)将毛壳素(+)-Chaetocin与N,N-二异丙基乙胺混合溶解在N,N-二甲基甲酰胺中，在室温氮气保护下搅拌20min；取马来酰亚胺修饰的缬氨酸-瓜氨酸二肽和N,N-二异丙基乙胺加入到反应液中，室温下搅拌过夜；

(B)反应完毕后加入三氟乙酸和乙酸淬灭反应液，油泵减压浓缩，硅胶柱层析纯化得到棕黄色固体。

5.一种如权利要求1或2所述的抗HER2抗体-毛壳素偶联物在制备抗HER2阳性肿瘤药物中的应用。