[发明专利]金叶过路黄组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，具体包括以下步骤：1）消毒灭菌；2）愈伤组织的诱导；3）愈伤组织的分化培养；4）壮苗培养；5）生根培养；6）金叶过路黄的炼苗及移栽。本发明的金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，通过建立金叶过路黄的组培快繁体系，金叶过路黄从无芽茎段的外植体到移栽成活经历时长260d~280d，繁殖系数为6~7，成活率95%以上。

技术领域

本发明涉及金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，属于金叶过路黄的栽培种植技术领域。

背景技术

金叶过路黄是报春花科过路黄属多年生匍匐茎宿根草本植物，具丰富的地表匍匐茎，茎节较短，节间能着地生根；叶卵圆形，叶色金黄色，具有较高的观赏价值，是不可多得的耐粗放管理的彩叶地被植物。其生长期长、绿色持续期长，能够平卧匍匐生长，蔓延扩展能力很强，植株极富密集性，平卧整齐。因其耐粗放管理、耐旱、耐寒、耐热性强，近年来金叶过路黄在国内外绿化产业中需求日益旺盛，因此应加快其繁殖速度，满足其日益增加的市场需求，对推动园林建设事业的发展，特别是对绿地建设具有一定的实用价值。自然条件下以种子和分株形式繁殖，种子繁殖的繁殖周期为1年以上，成活率60％～70％；分株繁殖的繁殖周期虽低于1年，但成活率较低，成活率90％左右，繁殖系数小于1。由于其繁殖速度较慢，繁殖系数和成活率低限制了它的推广应用。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，通过组培繁殖可以提高金叶过路黄的繁殖系数和成活率及繁殖速度，这对丰富我国彩叶绿化地被植物有一定的意义。本研究以金叶过路黄无芽茎段为外植体材料，通过不同的培养基诱导其产生愈伤组织、不定芽、芽增殖及生根，建立金叶过路黄组培快繁体系，以期采用组培技术进行大量繁殖，丰富种质资源。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：本发提供了金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

1)消毒灭菌：选取金叶过路黄的当年生枝条，以顶端芽为起始芽截取第二个芽至第三个芽之间的无芽茎段为外植体，将外植体放在流水下反复冲洗1h～2h，加入适量的洗涤剂浸泡清洗3次，边浸泡边振荡，冲洗干净后移至超净工作台进行下一步的消毒处理：先用体积浓度75％酒精浸泡20s～25s，用无菌水反复冲洗振荡外植体至少3次，每次冲洗时间不少于5min；再转入质量浓度0.1％的升汞消毒10min～15min，用无菌水反复冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；

2)愈伤组织的诱导：将消毒灭菌好的金叶过路黄外植体横向切成0.2cm～0.4cm长的小段，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上培养获得愈伤组织；

3)愈伤组织的分化培养：外观表现良好的愈伤组织切成2mm～3mm的小块，接入分化培养基中进行分化培养，在愈伤组织上萌发出一定数量的不定芽；

4)壮苗培养：将不定芽切接种于壮苗培养基上进行壮苗培养得到健壮、且色泽翠绿的无根幼苗；

5)生根培养：把健壮的金叶过路黄无根幼苗转移到生根培养基上培养每苗分化出4～6条根；

6)金叶过路黄的炼苗及移栽：生根后的幼苗在温度20±2℃的温室内拧松瓶盖放置3d～5d进行炼苗然后再移栽。

其中，上述步骤2)中的诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA(0.4～0.5)mg/L+ZT0.2mg/L+2,4-D0.05mg/L+蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L，PH值5.6～5.8。

其中，上述步骤2)中的培养条件为：温度22±2℃、暗培养、培养地点为无菌培养室。

其中，上述步骤3)中的分化培养基的配方为：MS+6-BA(0.4～0.5)mg/L+ZT0.3mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L，pH值5.8～6.0。