[发明专利]一种油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法

权利要求书

1.一种油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，步骤如下：

(1)嫁接：收集不同种类的南瓜种质材料，并将南瓜种子播种，每个品种播种15-25株，待南瓜苗长至两叶一心时嫁接黄瓜接穗，嫁接前将砧木南瓜的真叶掐掉，留住生长点；嫁接苗定植10-15株，并保留两条蔓，一条黄瓜蔓，一条南瓜蔓；

(2)黄瓜油亮性筛选：以不脱蜡粉的黄瓜实生苗为空白对照，嫁接苗之间进行比较筛选，选出黄瓜脱蜡粉最明显、亮度最好的材料，在黄瓜结瓜2-3条后及时将黄瓜蔓去除，只保留南瓜蔓以待鉴定筛选抗病性状或留种；

(3)南瓜砧木抗病性筛选：对嫁接苗进行抗枯萎病、抗白粉病、抗CGMMV的筛选，抗病且黄瓜油亮性材料自交并保留F1代南瓜种子；南瓜砧木抗枯萎病筛选在嫁接苗定植时开始，抗白粉病和CGMMV筛选在嫁接苗定植后开始，或在去掉黄瓜蔓后开始；

(4)稳定性状的筛选：将F1代南瓜种子播种得到南瓜苗，重复步骤(1)-(3)筛选出F2代南瓜种子；将F2代南瓜种子播种得到南瓜苗，重复步骤(1)-(3)筛选出F3代南瓜种子；将F3代南瓜种子播种得到南瓜苗，重复步骤(1)-(3)筛选出F4代南瓜种子；将F4代南瓜种子播种得到南瓜苗，重复步骤(1)-(3)筛选出F5代南瓜种子，即为稳定遗传材料。

2.根据权利要求1所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中采用插接方法嫁接。

3.根据权利要求1所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中嫁接完后用地膜遮阴保湿3-4天，之后掀开地膜，嫁接5-7天后撤去地膜。

4.根据权利要求3所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中掀开地膜后去掉1-2片南瓜真叶。

5.根据权利要求1所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中抗枯萎病的筛选采用浸根接种法：准备浓度为10⁶-10⁷个孢子/ml的尖孢镰刀菌孢子悬浮液，将2片真叶期的嫁接苗从营养土中取出，水洗冲掉根系表面的营养土，剪掉嫁接苗1/5-1/3的根系造成侵染伤口，将剩下的根系全部没于孢子悬浮液中，8-12分钟后取出，然后定植于试验地中；每份材料须接种至少10株嫁接苗作为重复；定植后保持温度21-30℃，观察目标材料的发病情况，接种后18-25天，植株发病情况稳定，即可评价出品种的抗病性。

6.根据权利要求5所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，所述尖孢镰刀菌孢子悬浮液的制备方法为：取枯萎病发病严重的南瓜植株，从发病部位采集枯萎茎秆，在无菌条件下，放入PDA平板上在28℃的培养箱中培养2天后观察菌落情况，挑取菌丝进行纯化和培养，培养8-10天，待纯化的菌丝长满平板然后打菌饼于PDB中，25℃，180rpm，在恒温摇床内摇菌24-36小时，镜检计数，然后用灭菌水制成所需浓度的悬浮液。

7.根据权利要求1所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，步骤(3)中抗白粉病的筛选采用喷雾接种法接种，用喷雾器将浓度为10⁵-10⁶个孢子/ml的白粉病菌孢子悬浮液均匀的喷施在南瓜老叶的正反两面，喷施至菌液布满叶片但不下滴，接种后保持温度20～25℃，湿度为70-80％，黑暗培养20-30小时，然后转入昼温22-28℃，夜温15-20℃的温室内正常管理，接种7天开始观察，20天内病情基本稳定。

8.根据权利要求7所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，所述白粉病菌孢子悬浮液的制备方法为：直接在田间采集新鲜叶子上粉末状分生孢子，加入蒸馏水，离心3～5分钟，镜检计数，用无菌水配制成浓度为10⁵-10⁶个孢子/ml的悬浮液。

9.根据权利要求1所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，抗CGMMV的筛选采用摩擦接种法接种，选择生长健康的南瓜叶，在叶片上均匀地撒少量金刚砂，用纱布蘸取病毒接种液，在叶面朝一个方向轻轻摩擦3-5次；7天后开始观察症状，每隔7天调查1次，一个月即能稳定发病症状得到鉴定结果。

10.根据权利要求9所述的油亮型抗病砧用南瓜材料的筛选方法，其特征在于，所述病毒接种液的制备方法为：将CGMMV在南瓜叶上扩繁，取发病明显的新鲜叶片，按照质量体积比1:10加入磷酸缓冲液，并在研钵中充分研磨，纱布过滤，现配现用。