[发明专利]POU结构域改造蛋白对多能干细胞的高效诱导

权利要求书

1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列具有下列特征的至少之一：

(1)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第152位氨基酸由T突变为R；

(2)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第208位氨基酸由E突变为P；

(3)与SEQ ID NO：1相比，所述多肽的第230～256位氨基酸被替换为SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID NO：2～7所示的氨基酸序列。

3.一种获得权利要求1～2任一项所述多肽的方法，其特征在于，包括：

(1)选取Oct4的POU结构域的第7、21、18、22、78、151位的氨基酸，通过突变处理构建6个饱和突变文库多肽；

(2)将Oct1、Oct6、Brn2、Oct4的POU结构域的POUh、Linker、POUs进行第一排列组合处理，构建嵌合体突变文库多肽；

(3)保持C末端和N末端为Oct4相应序列；

(4)将所述突变文库多肽和所述嵌合体突变文库多肽分别同Sox2、c-Myc、Klf4一同诱导体细胞，观察诱导多能干细胞的诱导效率，

其中，所述多能干细胞的诱导效率大于1倍的野生型Oct4的诱导效率是待筛选目标多肽的指标；

(5)将所述目标多肽进行第二排列组合处理，构建待筛选文库多肽；

(6)将所述待筛选文库多肽分别同Sox2、c-Myc、Klf4一同诱导体细胞，观察诱导多能干细胞的诱导效率，

其中，所述多能干细胞的诱导效率大于2倍的野生型Oct4的诱导效率是目的多肽的指标。

4.一种分离的核酸，其特征在于，具有SEQ ID NO：8～13所示的核苷酸序列。

5.一种构建体，其特征在于，携带权利要求4所述的核酸。

6.一种改变细胞命运的方法，其特征在于，包括：所述细胞过表达权利要求1～2所述的多肽。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述细胞是体细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，进一步包括将所述体细胞在基础培养基或添加有vitamin C的培养基中进行培养。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述培养的时间为至少3天。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox、Klf4和c-Myc。

11.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox、Klf4。

12.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox17EK、Klf4和c-Myc。

13.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox11、Klf4和c-Myc。

14.据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox2KE、Klf4和c-Myc。

15.据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Klf4、c-Myc。

16.据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox2。

17.据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述细胞同时过表达Sox17EK。

18.一种获得诱导多能干细胞的方法，其特征在于，包括：所述细胞过表达权利要求1～2所述的多肽，

任选地，所述细胞是体细胞，

任选地，进一步包括将所述体细胞在基础培养基或添加有vitamin C的培养基中进行培养，

任选地，所述培养的时间为至少3天。

任选地，所述细胞同时过表达Sox、Klf4和c-Myc，

任选地，所述细胞同时过表达Sox、Klf4，

任选地，所述细胞同时过表达Sox17EK、Klf4和c-Myc，

任选地，所述细胞同时过表达Sox11、Klf4和c-Myc，

任选地，所述细胞同时过表达Sox2KE、Klf4和c-Myc，

任选地，所述细胞同时过表达Klf4、c-Myc，

任选地，所述细胞同时过表达Sox2，

任选地，所述细胞同时过表达Sox17EK。