[发明专利]一种利用鸡胚血管系统检测和评价结膜刺激性及粘膜刺激性的方法

权利要求书

1.一种利用鸡胚血管系统检测和评价结膜刺激性及粘膜刺激性的方法，其特征是包含以下步骤：

(1)绒毛尿囊膜的制备

选取SPF级受精鸡胚，制备具有绒毛尿囊膜的受精鸡胚备用；

(2)结膜刺激试验

2.1受试物制备

选取受试物，用溶剂溶解后，配制一组具有浓度梯度的稀释液备用，并设置阳性对照、阴性对照和基准对照；

2.2筛查试验

选取受试物，用溶剂溶解后，重新配制一组具有浓度梯度的稀释液，进行受试物结膜刺激范围筛查试验，确定引起鸡胚反应的大概浓度范围；

2.3结膜刺激性RC₅₀确定试验

选取受试物，用溶剂溶解后，再重新配制一组具有浓度梯度的稀释液，取步骤(1)中制备的受精鸡胚，在所述受精鸡胚的鸡胚尿囊膜上放置特富龙“О”形环，将该组具有浓度梯度的稀释液、阳性对照、阴性对照和基准对照分别加入到特富龙“О”形环，恒温培养箱孵育后，观察录血管的各种变化，并与环外血管相比较，血管的变化按照表1进行判定和分级，血管反应分级在1级以上为血管反应阳性，按对数图计算结膜刺激性RC₅₀的值，即使半数鸡胚出现阳性反应的受试物浓度；

表1光毒性和结膜刺激的血管反应观察及分级

分级观察描述0观察不到血管褪色或者出血，血管膜正常1血管白色无血液，管壁清晰；或/和毛细血管充血2毛细胞血管可见细小出血点，出血面积＜20％3明显的血管出血，散在或出血区域＞20％，＜50％4严重出血，出血区域超过50％

(3)粘模刺激试验

3.1受试物制备

液体受试物以原液未稀释的形式进行试验，膏状、油状、粘稠状、微粒状或颗粒样产品以原样进行试验或采用纯净水或玉米油稀释后进行试验，并设置阳性对照、阴性对照和基准对照；

3.2粘膜刺激试验

取步骤(1)中制备的受精鸡胚，在所述受精鸡胚的鸡胚尿囊膜上放置特富龙“О”形环，将受试物、阳性对照、阴性对照和基准对照分别加入到特富龙“О”形环，作用后冲洗去除受试物，直接观察结果，记录每种毒性效应变化的程度，每次试验6只鸡胚，并与环外血管相比较，血管的变化按照表2进行判定和分级，血管反应分值在1分和1分以上为血管反应阳性；

表2粘膜刺激血管反应评分表

(4)预测模型和分类

4.1结膜刺激性预测模型

从浓度-反应关系计算受试物的RC₅₀，根据以下条件作出结膜刺激性判断：

RC₅₀≥50％，预测“无刺激性/温和性”，

10.0％＜RC₅₀且＜50％，预测“无刺激性”，

3.0％≤RC₅₀且＜10.0％，预测“弱刺激性”，

1.0％≤RC₅₀且＜3.0％，预测“中度刺激性”，

RC₅₀＜1.0％，预测“重度刺激性或腐蚀性”；

4.2口腔粘模刺激性预测模型

计算每只鸡胚3种反应的总评分，再计算6只鸡胚反应的平均总评分AES；

根据以下条件作出口腔粘模刺激判断：

AES≤6：预测“无口腔粘膜刺激性”；

6＜AES且≤12：预测“轻度口腔粘膜刺激性”；

12＜AES且＜16：预测“中度口腔粘膜刺激性”

AES≥16：预测“严重口腔粘膜刺激性”。