[发明专利]一种抗EGFR/PD-L1双靶向抗体、其制备方法及用途

说明书

本发明提供了一种EGFR/PD‑L1双靶向抗体、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。所述EGFR/PD‑L1双靶向抗体是以Cetuximab抗体和RG7446抗体为亲本，采用knob‑into‑hole技术制备而成。所述双靶向抗体抗体具有比Cetuximab抗体和RG7446抗体联合使用都更强的抗肿瘤效果，应用前景巨大。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种EGFR/PD-L1双靶向抗体、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肿瘤尤其是恶性肿瘤是当今世界严重危害人类健康的疾病，其致死率居各种疾病致死率的前列。而且近年来，其发病率呈明显上升趋势。恶性肿瘤治疗效果差，晚期转移率高，预后多不佳。目前临床上所采用的常规治疗方法如放疗、化疗和手术治疗虽然在很大程度上缓解了病痛，延长了生存时间，但这些方法均存在很大的局限性，其疗效难以进一步提高。

抗体靶向性药物具有特异性好、副作用小、半衰周期长等优点，已广泛的应用于肿瘤的临床治疗。目前，已经发现了多种能够作为肿瘤靶向治疗较好的靶点：EGFR家族是一组跨膜蛋白,参与调节许多生物学关键过程,如细胞增殖、分裂、迁移和分化等。EGFR在多种肿瘤细胞上均高表达，并通过与配体结合,激活许多下游信号传导通路,进而参与肿瘤细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移、凋亡及肿瘤血管生成等。因此，EGFR已经成为肿瘤靶向治疗的一个理想靶点。

程序性死亡分子1(programmed death 1,PD-1)是免疫球蛋白B7-CD28家族成员之一，可表达于活化的CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、单核细胞和树突状细胞上,目前已经证实其与效应性T细胞应答活性密切相关。PD-L1是PD-1的主要配体，在包括NSCLC、黑色素瘤、肾细胞癌等许多恶性肿瘤中高表达。PD-1/PD-L1信号通路的激活可导致免疫抑制性肿瘤微环境形成,使肿瘤细胞逃避机体免疫监视和杀伤,而阻断PD-1/PD-L1信号通路可以逆转肿瘤免疫微环境,增强抗肿瘤免疫效应。目前，靶向PD-1、PD-L1的抗体药物在多种肿瘤的临床试验中都取得较好的疗效。这些结果为后续肿瘤靶向治疗指明了方向。然而即使是目前疗效较好的肿瘤靶向抗体，其反应率和疗效依然有待提高，大部分患者在治疗过程中也逐渐产生耐受。众所周知，肿瘤在发生、发展过程中的异质性和复杂性决定了，仅仅依靠单一靶点的抗体靶向药物很难更加有效杀伤肿瘤细胞、激活抗肿瘤免疫，进而避免肿瘤复发。因此，多靶向抗体是目前抗体靶向药物研究的一个热点。

发明内容

为了解决上述问题，发明人进行了长期研究，经大量试验，利用基因工程技术构建了一类具有类似全抗体结构与功能的EGFR/PD-L1双靶向抗体，该双靶向抗体既可以靶向、杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞，又能够阻断PD-1/PD-L1免疫抑制信号。

因此，本发明一个目的是，提供一种EGFR/PD-L1双靶向抗体及其相应的药物制剂，所述EGFR/PD-L1双靶向抗体是由4条肽链构成的全抗体,其既可以靶向、杀伤EGFR阳性的肿瘤细胞，又能够阻断PD-1/PD-L1免疫抑制信号。

本发明的另一个目的是，提供一种EGFR/PD-L1双靶向抗体的制备方法。

根据本发明的一个方面，以EGFR的抗体Cetuximab和PD-L1的抗体RG7446为亲本，运用基因工程技术获得双靶向抗体，所述双靶向抗体的结构如图1所示。

所述双靶向抗体包括4条肽链，分别为如SEQ ID NO:20所示的RG7446HV-CL-Hinge-CH2-CH3、如SEQ ID NO:22所示的RG7446LV-CH1、如SEQ IDNO:18所示的Cetuximab重链knob突变体、如SEQ ID NO:26所示的Cetuximab轻链。

进一步地，上述双靶向抗体可应用于抗肿瘤药物的制备；