[发明专利]一种抗EGFR/PD-1双靶向抗体、其制备方法及用途

权利要求书

1.一种EGFR/PD-1双靶向抗体，其特征在于所述抗体由下述氨基酸序列的四条肽链组成，分别为：

如SEQ ID NO:20所示的5C4HV-CL-Hinge-CH2-CH3、如SEQ ID NO:22所示的5C4LV-CH1、如SEQ ID NO:18所示的Cetuximab重链knob突变体和如SEQ ID NO:26所示的Cetuximab轻链。

2.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1所述的抗体，由如下述核苷酸序列所示的多核苷酸组成：编码5C4HV-CL-Hinge-CH2-CH3的如SEQ ID NO：19所示的多核苷酸，编码5C4LV-CH1的如SEQ ID NO：21所示的多核苷酸，编码Cetuximab重链knob突变体的如SEQ IDNO：17所示的多核苷酸和编码Cetuximab轻链的如SEQ ID NO：25所示的多核苷酸。

3.一种表达载体，其特征在于含有权利要求2所述的多核苷酸。

4.一种宿主细胞，其特征在于含有权利要求3所述的表达载体。

5.一种权利要求1所述的EGFR/PD-1双靶向抗体的制备方法，包括：

1)分别克隆如SEQ ID NO.1所示的EGFR抗体Cetuximab重链可变区和如SEQ ID NO.23所示的EGFR抗体Cetuximab轻链可变区，以及如SEQ ID NO.3所示的PD-1抗体5C4的重链可变区和如SEQ ID NO.5所示的PD-1抗体5C4的轻链可变区；

2)在抗体Fc区域分别构建knob突变体,以及hole突变体；

3)将PD-1抗体5C4轻链可变区与抗体重链CH1区融合构建5C4LV-CH1融合片段；

4)将PD-1抗体5C4重链可变区与抗体轻链恒定区融合构建5C4HV-CL融合片段；

5)将Cetuximab重链可变区和5C4HV-CL中的一个与knob突变体融合，将另一个与hole突变体融合，装入表达载体；

6)将构建好的三个表达载体与装有Cetuximab轻链基因的表达载体共同转染进行表达，分离纯化；

所述抗体Fc区域knob突变体的突变方式为，第366位的Thr突变为Trp，第354位的Ser突变为Cys和点突变N297Q；所述抗体Fc区域hole突变体的突变方式为，第366位的Thr突变为Ser，第368位的Leu突变为Ala，第407位的Tyr突变为Val，第394位的Tyr突变为Cys和点突变N297Q。

6.一种药物组合物，含有权利要求1所述的EGFR/PD-1双靶向抗体。

7.权利要求1所述双靶向抗体在制备治疗肺癌药物中的用途。