[发明专利]一种户尘螨特异性IgE半定量检测试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测户尘螨特异性IgE的试剂盒及其检测方法，具体涉及一种基于荧光量子点免疫层析试纸和图像分析技术的户尘螨特异性IgE半定量检测试剂盒及其检测方法。本发明属于免疫分析技术领域。

背景技术

尘螨是最重要吸入物过敏原之一，普遍存在于室内中，基中的户尘螨和粉尘螨是最主要的两种螨，其中，户尘螨(House Dust mite，HDM)，体呈长圆形，体长约240～280μm，又称欧洲尘螨，是欧亚大陆上最优热的致敏性螨种。上海、北京、广州、哈儿滨等地调查表明，户尘螨也是我国居室优势螨种，存在于卧室的床、被、枕头以及地毯、沙发等处。我国长江以南地区的优势种，在北方密度较低。

户尘螨过敏是指当接触户尘螨过敏原后，机体能产生较多的尘螨特异性IgE抗体，此种抗体能渗入粘膜组织，并与相应抗原在肥大细胞和嗜碱性细胞表面相结合，使之成为致敏组织。多数过敏性哮喘的发生、发展和症状的持续与尘螨过敏密切相关。研究表明，有80％的哮喘患者尘螨点刺试验阳性，而正常人群的阳性率为5％-30％。世界各地流行病学调查均表明尘螨是最主要的过敏原，多数过敏性哮喘的发生、发展、症状的急性发作和持续都与尘螨过敏密切相关。尘螨也是过敏性鼻炎最主要的过敏原，鼻腔受到尘螨刺激后出现急性反应和迟发反应，可通过长期诱导鼻黏膜炎症，进一步发展为鼻息肉。过敏性鼻炎是一个全球性健康问题，它在世界各地均常见，其全球全病率达10％-25％，并且患者数仍在增加，它可以影响患者的日常生活、学习及工作效率，并且造成经济上的严重负担。此外，尘螨被认为是特应性皮炎最重要的过敏原之一，而且患者对尘螨的过敏程度与特应性皮炎的病情严重程度密切相关。尘螨引起特异性皮炎的途径有两个：直接通过皮肤引起和通过吸入尘螨过敏引起。

传统用于户尘螨特异性IgE检测的方法是免疫印迹法，但该方法耗时长、步骤复杂，且需要特殊的仪器才能够完成。

免疫检测技术是基于抗体与抗原间特异性反应的原理对待测物进行定性定量分析的检测方法，低浓度抗原的免疫检测依然是临床诊断和检验检疫领域面临的重要问题，低浓度抗原的准确、可靠检测可以为疾病的早期诊断和及时治疗提供重要的科学依据，提高免疫检测极限的方法之一是制备高灵敏的免疫探针。荧光免疫分析技术是利用荧光物质标记抗体或者抗原分子，通过与待分析物的特异性结合后检测荧光信号的强度变化，实现对目标分析物的定性和定量检测。量子点(quantum dot，简称QDs)作为一种新型荧光纳米晶，具有一些独特的荧光性能，如荧光发射波长可控、发射峰狭窄对称、激发波长范围广、量子效率高、光稳定性好等，量子点的上述荧光特性为制备高灵敏度的免疫荧光探针提供了很好的选择(参见文献：J.Lei,H.Ju,Signal amplification using functional nanomaterials for biosensing,Chem.Soc.Rev.2012,41,2122-2134)。

鉴于此，本发明提出了一种基于荧光量子点免疫层析试纸和图像分析技术的半定量检测户尘螨sIgE的方法及试剂盒，该方法具有方便、快捷、无需特殊检测仪器等特点，能够满足目前对户尘螨特异性IgE检测的迫切需求，尤其适于大规模人群过敏原筛查和家庭检测等环境。

发明内容

本发明的目的在于克服目前的户尘螨sIgE检测方法耗时长、步骤复杂、需要特殊的仪器等问题，提供一种基于荧光量子点免疫层析试纸和图像分析技术的半定量检测户尘螨sIgE的方法及试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

表面带羧基的量子点纳米球分别与羊抗人sIgE、鼠抗兔IgG共价偶联，制备得到检测荧光液；硝酸纤维素膜上分别固定尘螨抗原和兔IgG为T线和C线，然后与样品垫、吸水垫和塑料背板组装得到试纸条。样本与荧光液混合反应后，加在样本垫上通过层析作用荧光液与T线和C线反应；当样本中有尘螨sIgE时，荧光量子点会被T线上的尘螨抗原特异性捕获，T线量子点的荧光强度与样本中尘螨sIgE浓度成正比。荧光试纸条在紫外灯照射下用数码相机拍照，图像用ImageJ软件进行RGB色彩通道分离后，进行灰度强度积分，从而实现对sIgE的半定量检测。开发的检测方法可以在0.2-10U/mL范围内半定量检测sIgE。

本发明的一种户尘螨特异性IgE半定量检测试剂盒，包括检测荧光液以及用于户尘螨特异性IgE半定量检测的免疫层析试纸条；

其中，所述的检测荧光液是通过将表面带羧基的量子点纳米球分别与羊抗人sIgE、鼠抗兔IgG共价偶联，混合后制备得到检测荧光液；