[发明专利]一种不使用化学药品低温制备间充质细胞提取物的新技术在审
申请号: | 201710371149.4 | 申请日: | 2017-05-15 |
公开(公告)号: | CN108871887A | 公开(公告)日: | 2018-11-23 |
发明(设计)人: | 阿拉阿贝德卡里姆穆罕默德福阿德;马颖;马铎 | 申请(专利权)人: | 广州资生生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28;G01N30/02;G01N30/06;G01N21/25 |
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地址: | 510000 广东省广州市天河区*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 间充质细胞 提取物 化学药品 低温制备 多肽 天然的 细胞器 真菌 毒素 细菌 病毒 补充 安全 | ||
一种不使用化学药品低温制备间充质细胞提取物的新技术,只采用机械或天然的提取方法从间充质细胞中提取最大数量酶和多肽,可提取出细胞器内部的酶和多肽,且提取的提取物绝无细菌,病毒,真菌或毒素。提取过程严格按照最新的GMP标准和补充要求执行,忠于患者的安全和疗效。
技术领域
本发明的技术领域为生物分子制造产业。
背景技术
从活细胞中提取蛋白质,不管是从动物来源还是细菌,都是所有的科学家所面临的一大挑战。理论上讲,似乎提取蛋白质是很简单的事情,实际上也确实如此。然而,如果保证所提取出的蛋白质的数量和价值依然是一大难点。
简单来说,将细胞置于低渗溶液中将导致活细胞膨胀,从而导致细胞膜破裂,释放出细胞质及蛋白质。
发明内容
目前分离细胞蛋白质仍然采用传统途径,所有从组织中提取蛋白质的方案都含有缓冲液或使细胞溶解的化学药品。那些没有用到化学药品的方案很难提取出大量的蛋白质。如果样品为组织样品而不是采自单独的或培养细胞就必须用到蛋白酶。某些方案提到使用声波解降法打破细胞膜和细胞器。声波解降法看来是个完美的方案,但是组织以及采用样品的性质却在声波解降法实施过程中给预期的完美效果制造了不便。大组织样品对声波解降法反应不大,且会遗留组织块残片。
总的来说,从器官内提取蛋白质的存在以下五大难点:
1.时间因素
2.器官的性质
3.添加的化学药品难以清理
4.蛋白质的数量和质量
5.蛋白质的特定性
时间因素:
这是最主要的一个难点。此时间特指从动物被屠宰到提取最终步骤完成之间的时间。提取多肽的质量差异会很大。器官如果立即摘取或-85度冷冻,酶的活性才得以保存而不至被细菌破坏。通常如果摘取不当,器官至多存活6小时。6小时时间看来不短,但一旦关系到组织的处理就显得很短了。冷冻是保持器官存活以及细胞酶和多肽活性的唯一方案。冷冻或保存在特定温度限制以下又是另外一大难题,特别是实验室的管理流程可导致大幅度升温。
器官的性质:
从动物身上摘取器官过程复杂,需保持器官和重要解剖结构的完整性。例如摘取大脑就异常复杂。大脑是个重要的器官,脆弱且结构不分明。它位于颅骨中间,通过脑干连接脊髓,并通过视神经连接眼睛。摘取和保存的过程需同步进行。如此复杂的结构容易在摘取过程中导致大脑的部分活性结构被损坏。同时,摘取过程中大脑组织的脆弱性也是亟需解决的一大难题。
单纯从肌肉组织中获取多肽的概念是不现实的。将肌肉与骨骼和软骨组合在一起产生一种复合多肽,能够同时作用于人体的这三个密切关联的系统。
添加的化学药品难以清除:
从细胞中提取蛋白质的环节必须使用化学药品的两个原因:清除器官上的血液以及切断细胞间的结缔组织链。任何器官内都含有一定的血液。不同器官的含血量也各有不同,肝脏,心脏,脾脏中含血量较多,肺和胸腺含血量相对较少。蛋白质提取环节中无论血液含量多少都需要将它从组织中清除。大多数常用方案使用化学试剂作为裂解缓冲液清除红细胞含量,离心机清除血红蛋白的含量。无论该方案如何精确,裂解缓冲液在溶液中始终留有残余。
切断细胞链促使细胞破裂的裂解缓冲液也有同样的化学药品残留问题。
蛋白质的数量和质量:
大多数人对数量和质量都难以取舍。提取的主要目的就是获得大量的活性蛋白。那么难题又来了,实验室过程的本性会让溶液的温度升高,从而破坏酶或导致蛋白质本性被破坏。因此,所有的操作应在低于10度的环境下进行,否则蛋白质的质量将大打折扣。
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