[发明专利]一种基于发卡错配循环放大技术检测DNA的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种基于发卡错配循环放大技术检测DNA的方法。其原理是以鲁米诺还原氯金酸，得到鲁米诺胶体金纳米粒子LumAuNPs，以探针DNA修饰LumAuNPs，得化学发光探针；然后以磁珠为载体固定发卡结构的捕获DNA，在目标物DNA存在时，捕获DNA的发卡结构被打开，并在化学发光探针上的探针DNA的杂交作用下，通过催化发卡自组装技术将化学发光探针连接在磁珠表面；经过磁分离后，再加入羟胺‑O‑磺酸，以LumAuNPs—羟胺‑O‑磺酸为化学发光体系，进行化学发光测定，根据产生的化学发光实现目标DNA的测定。方法具有简单、灵敏度高的优势。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种基于发卡错配循环放大技术检测DNA的方法。

背景技术

虽然催化发卡自组装技术有很多优点，但是发卡结构在正常情况下会自己打开发卡结构，即使没有引发链存在时也会形成发卡自组装，即非特定性自组装，这样就会造成背景信号过高，所以本申请在发卡结构上引入错配碱基，以降低实验的背景信号，提高信噪比。本申请以磁珠为载体固定捕获DNA，通过错配催化发卡自组装技术并通过羟胺-O-磺酸作为氧化剂催化LumAuNPs产生化学发光的方法，对DNA进行了检测。方法具有灵敏度高、选择性好的特点。

发明内容

本发明旨在发明一种方法简单、灵敏度高的测定DNA的方法。

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于发卡错配循环放大技术检测DNA的方法。

实现本发明目的技术方案是：

一种基于发卡错配循环放大技术检测DNA的方法。其原理是以鲁米诺还原氯金酸，得到鲁米诺胶体金纳米粒子LumAuNPs，以探针DNA修饰LumAuNPs，得化学发光探针；然后以磁珠为载体固定发卡结构的捕获DNA，在目标物DNA存在时，捕获DNA的发卡结构被打开，并在化学发光探针上的探针DNA的杂交作用下，通过催化发卡自组装技术将化学发光探针连接在磁珠表面；经过磁分离后，再加入羟胺-O-磺酸，以LumAuNPs—羟胺-O-磺酸为化学发光体系，进行化学发光测定，根据产生的化学发光实现目标DNA的测定。LumAuNPs—羟胺-O-磺酸为化学发光体系，提高了检测信号强度；在探针DNA引入两个错配碱基降低了背景信号，提高了测定灵敏度。

本发明是通过以下措施来实现的：一种基于发卡错配循环放大技术检测DNA的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)鲁米诺胶体金纳米粒子的制备；

(2)捕获DNA修饰磁珠的制备；

(3)探针DNA修饰LumAuNPs的制备；

(4)目标DNA的检测。

优选的，所述的鲁米诺胶体金纳米粒子的制备包括以下步骤：

实验开始前，将所用的玻璃仪器用HNO₃/HCl(3:1,v/v)的王水浸泡24h后，用二次蒸馏水冲洗，放入烘箱烘干。取一定量的1％的氯金酸溶液加去离子水稀释成0.02％的氯金酸溶液并置于三口烧瓶中，在磁力搅拌下加热回流煮沸；待溶液沸腾后，快速加入0.01mL～5mL 0.01M的鲁米诺溶液，继续加热煮沸，溶液的颜色由浅黄色变为黑色，最后变成酒红色，40min后停止加热，并在继续搅拌下冷却至室温，得鲁米诺胶体金纳米粒子，即LumAuNPs，将制得的LumAuNPs转移到棕色广口瓶中，4℃下保存备用。

优选的，所述的捕获DNA修饰磁珠的制备包括以下步骤：