[发明专利]一种基于烟粉虱化学感受蛋白的植物驱避剂筛选方法

权利要求书

1.一种基于烟粉虱化学感受蛋白的植物驱避剂筛选方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1)提供烟粉虱化学感受蛋白BtabCSP1；

2)通过竞争性荧光结合方法获得烟粉虱化学感受蛋白BtabCSP1与气味的结合反应谱，并计算结合常数K_A或解离常数K_D，

3)如果烟粉虱气味物质将1-NPN与BtabCSP1相对荧光值竞争至50％以下，并且结合常数K_A高于1.2×10⁴L/μmol以上或解离常数K_D低于60μmol/L以下时，确定为适合烟粉虱的气味驱避剂。

2.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤2)中竞争性荧光结合方法获得烟粉虱重组化学感受蛋白与气味的结合反应谱的方法步骤包括：

(1)荧光配基1-NPN与烟粉虱化学感受蛋白的结合，测定荧光值，

(2)选取烟粉虱气味物质和1-NPN进行竞争结合烟粉虱重组化学感受蛋白，测定1-NPN与BtabCSP1相对荧光值，计算结合常数K_A。

3.根据权利要求2所述的方法，所述步骤(1)的方法为：在281nm激发波长下，向1μmol/L的烟粉虱化学感受蛋白中逐次加入1mmol/L的1-NPN，充分混匀。

4.根据权利要求1所述的方法，所述步骤2)后还有气味驱避剂的验证步骤，所述验证采用Y型嗅觉仪测试。

5.根据权利要求1所述的方法，所述步骤1)中烟粉虱化学感受蛋白BtabCSP1的获取方法为：

A)提取烟粉虱成虫含触角在内的头部总RNA；

B)设计烟粉虱化学感受蛋白基因引物，通过RT-PCR获得烟粉虱化学感受蛋白基因全长；

C)构建烟粉虱化学感受蛋白基因的原核表达载体；

D)通过IPTG诱导烟粉虱重组化学感受蛋白重组表达，并通过镍琼脂糖凝胶亲和层析柱对其进行纯化。

6.根据权利要求5所述的方法，步骤D)中IPTG诱导烟粉虱重组化学感受蛋白表达的诱导条件为：IPTG浓度为0.5mmol/L，温度为30℃，诱导转速为200rpm，诱导时间为5h。