[发明专利]一种白芨种子快发壮生的培育方法

说明书

技术领域

本申请属于白芨的组培技术领域，具体地说，涉及白芨种子快发壮生的培育方法。

背景技术

白芨(Bletilla striata(Thunb.ex A.Murray)Rchb.f.)隶属兰科白及属，又名紫兰(根)、双肾草、白及等，是温带地生多年生草本兰科植物类群之一。白芨主要分布在中国的秦岭、淮河以南大部分地区、日本以及缅甸北部，适宜在常绿阔叶林、针叶林、草丛中和岩石石缝等温暖、阴凉湿润的环境中生长。

白芨是兰科植物中非常重要的药用植物之一，其假鳞茎中含有大量多糖，具有消肿生肌、止血收敛之功效。近年来，研究发现白芨块茎主要成分为葡聚糖苷、联苄、菲、三萜及其苷类、甾体及其皂苷。其中葡聚糖苷是白芨胶的主要的药用成分，具有许多药理活性，包括促进伤口愈合、血小板聚集止血、保护胃黏膜、抗肿瘤和抗补体活性。临床上广泛用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂、肿瘤栓塞及前列腺手术等。随着市场对白芨资源需求不断的扩大，我国大部分地区的野生白芨遭到过度采挖，导致其野生自然资源急剧减少，濒临灭绝，被国家列为重点保护的野生药用植物之一。

白芨种子细小且无胚乳，在自然状况下实生苗育苗很难萌发和生长，传统栽培主要靠地下块茎分株繁殖。分株繁殖种苗贵，投入成本高，培育周期长，繁殖系数低，难于满足人类日益升高的需求和生产快速发展的需要，因此组织培养成为了工厂化规模培育白芨种苗的主要技术途径。现有的组培技术环节较多，一般都需经过种子萌发-原球茎诱导-原球茎增殖-丛芽诱导-丛芽增殖-生根等6个环节才能在4个月内完成育苗(CN103314855 A)。为简化程序，有的将种子的萌发和壮苗都使用同一种培养基(CN106376328 A)，虽然缩短了培育周期，但培养基营养成分不能满足白芨组培苗各阶段的特殊营养需求，幼苗质量较低。有的在培养基中添加紫苏梗、威灵仙、漏芦、羌活等材料来促进种子萌发和幼苗的生长(CNIO460468O A)，但却增加了培育过程的复杂程度和培育成本。目前，白芨组培中使用的培养基一般都是MS基本培养基，用于种子萌发，反而萌发较慢，出苗不整齐，成本较高。改良后的组培过程转接次数多，程序繁琐，污染几率增加，成苗质量差、移栽成活低，不利于工厂化育苗。申请人单独使用兰科植物种子萌发通用的KC培养基培养白芨种子发现，萌发率高，生长也快，但营养成分少，组培苗纤细瘦弱，容易倒伏。

发明内容

本发明的目的在于克服目前白芨组培技术成本高、环节多、萌发晚、生长弱等诸多的不足，公开了一种基于KC和MS改良培养基的白芨种子早发壮生培育的方法，对白芨资源的保护以及白芨产业的发展壮大具有重要意义。

一种白芨种子快发壮生的培育方法，包括以下步骤：

1)接种：将果中种子取出，均匀播散在萌发培养基中，置于适宜培养条件培育；

2)转接：种子在所述萌发培养基中无菌培养60天，种子萌发并长到2.0±0.5cm高的小苗时，转接到壮苗培养基中在适宜条件下进行继代培养；

所述萌发培养基配方为：KC基本培养基+0.2mg/L6-苄氨基腺嘌呤+1.0mg/L萘乙酸+100g/L马铃薯+20g/L蔗糖+7g/L琼脂+300mg/L活性炭；

所述壮苗培养基的配方为：MS基本培养基+2.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+1.0mg/L萘乙酸+80g/L香蕉+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+500mg/L活性炭。

进一步地，如上所述的白芨种子快发壮生的培育方法，所述的KC培养基由以下组分配制：(NH₄)₂SO₄ 500mg/L，KH₂PO₄ 250mg/L，MgSO₄·7H₂O 250mg/L，Ca(NO₃)₂ 1000mg/L，MnSO₄·4H₂O 7.5mg/L，FeSO₄·7H₂O 25mg/L，溶剂为蒸馏水。

进一步地，如上所述的白芨种子快发壮生的培育方法，在萌发培养基中培养时，所需的适宜的培养条件为：温度25±2℃，光照1800-2500LUX，光/暗周期＝12h/12h，培养60天。