[发明专利]药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品及其制备方法

说明书

本发明属于微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品及其制备方法。药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品包括目标菌群和背景菌群，所述目标菌群由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌、产气肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌组成，所述背景菌群由金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌组成。本发明均匀性、稳定性符合能力验证要求，可以最大程度保证测试样品的稳定性，即使在运输及储存中大肠埃希菌的含量发生变化，在统计学意义上也不会影响耐胆盐革兰阴性菌的总量；样品的制备方法，工艺简单，成功率高。

技术领域

本发明属于微生物学检测方面的质量控制领域，特别涉及一种药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品及其制备方法。

背景技术

药品微生物学检验领域非常特殊。目前，虽然国内外已有认可机构组织药品微生物学能力验证和大规模的制备微生物能力验证样品的先例，但样品均为仅含耐胆盐革兰阴性菌的菌株，没有背景菌存在，与实际样品差异较大，且耐胆盐革兰阴性菌对温度敏感，样品的稳定性很难满足要求，即耐胆盐革兰阴性菌标准样品仍属空白领域。

耐胆盐革兰阴性菌指在胆汁酸中可以存活并繁殖的革兰阴性菌，包括肠杆菌科、假单胞菌属、气单胞菌属。肠杆菌科主要包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、奇异变形杆菌和产气肠杆菌等。如果制备的耐胆盐革兰阴性菌样品中，目标菌群易发生变化(繁殖和死亡等)，就会导致样品的保存期短，样品的均匀性和稳定性差。因此，综合考虑细菌的生化特性，选取性质相对稳定的菌群作为目标菌群对保证样品的均匀性和稳定性十分重要。耐胆盐革兰阴性菌样品制备的工艺技术要求比较高，并且样品的均匀性和稳定性与冻干的菌种、冻干的工艺条件、冻干保护剂的使用、再水化的介质等均有密切的关系。

药品中耐胆盐革兰阴性菌指标，直接反映着药品的卫生质量与潜在致病风险。如果药品中耐胆盐革兰阴性菌数超过一定限量，会导致患者直接感染耐胆盐革兰阴性菌，甚至有致命的风险。因此，制备均匀性与稳定性俱佳的耐胆盐革兰阴性菌样品，可以避免耐胆盐革兰阴性菌检验的随意性和不确定性，真实地反映检测实验室的能力。这对提高实验室质量控制水平，保障药品安全，甚至于打破国际贸易壁垒、提高我国药品国际竞争力都具有特殊重要的意义。

发明内容

本发明的目的是克服耐胆盐革兰阴性菌测定样品中总的活的细菌数目在运输、储存和测试等过程中菌落数都可发生变化的问题，提供一种药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品，均匀性、稳定性符合能力验证要求，本发明的另一个目的是提供该样品的制备方法，工艺简单，成功率高。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品，其特征是：包括目标菌群与背景菌群，所述目标菌群由大肠埃希菌(E.coil)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pnenmoniae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)组成，所述背景菌群由金黄色葡萄球菌(Rhodococcus equi)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)组成。

所述样品以海藻糖、脱脂奶粉和无菌水为基质，其中海藻糖的体积分数为12％、脱脂奶粉的体积分数为0.5％。

所述样品中目标菌群的目标浓度为10²CFU/mL，背景菌群的目标浓度为10³CFU/mL。

一种药品中耐胆盐革兰阴性菌能力验证样品的制备方法，其特征是：包括样品添加菌株的选择、冻干保护剂的配制、样品冻干、样品的均匀性和稳定性试验四个步骤，其中样品冻干过程为：菌株复苏传代—增菌—菌悬液配制—冻干和包装—储存，具体过程为：

(1)菌株复苏传代

将标准菌株接种到营养琼脂斜面培养基中，在36±1℃下使其复苏和生长，并对复苏的菌株进行鉴定；