[发明专利]通过抑制肿瘤抑制基因的天然反义转录物治疗肿瘤抑制基因相关性疾病

说明书

本申请是以下申请的分案申请：申请日：2009年12月3日；申请号：200980156467.2(PCT/US2009/066654)；发明名称：同上。

交叉引用

本申请要求2008年12月4日申请的美国临时申请号61/119,973、2009年3月4日申请的美国临时申请号61/157,249、2009年4月3日申请的美国临时申请号61/166,381和2009年2月23日申请的美国临时申请号61/154,594的权益，这些申请通过引用其全部内容结合到本申请。

发明领域

本发明的实施方案包括调节肿瘤抑制基因的表达和/或功能的寡核苷酸和相关分子。

发明背景

DNA-RNA和RNA-RNA杂交对核酸功能的许多方面起重要作用，包括DNA复制、转录和翻译。杂交对于检测具体核酸或改变核酸表达的各种技术也很重要。反义核苷酸，例如，通过杂交至靶RNA而破坏基因表达，从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制。反义DNA还具有DNA-RNA杂交体作为核糖核酸酶H消化底物的特征，这种活性存在于大多数的细胞类型中。反义分子可以被运送进入细胞(例如寡脱氧核苷酸(ODNs))，或者他们可由内源基因表达为RNA分子。FDA最近批准了一种反义药物―VITRAVENE^TM(用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，说明反义分子有治疗实用性。

发明概述

该概述部分概括介绍本发明，简要说明本发明的性质及实质。应理解的是概述部分不能用来解释或限制权利要求的范围或含义。

在一个实施方案中，本发明提供通过使用反义寡核苷酸靶向天然反义转录物的任何区域从而抑制天然反义转录物的作用，导致相应的有义基因上调的方法。本文还考虑到抑制天然反义转录物可以通过siRNA、核酶和小分子来实现，这些也被认为属于本发明的范围内。

一个实施方案提供体内或体外调节患者细胞或组织里肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，其包括使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与一种多核苷酸的反向互补序列具有至少50％的序列同一性，所述多核苷酸包含以下核苷酸序列内的5-30个连续核苷酸：SEQ ID NO:4的核苷酸1-1675、或者SEQ ID NO:5的核苷酸1-518、或者SEQ ID NO:6的核苷酸1-759、或者SEQ ID NO:6a的核苷酸1-25892、或者SEQ ID NO:6b的核苷酸1-279、或者SEQ ID NO:7的核苷酸1-1982、或者SEQ ID NO:8的核苷酸1-789或者SEQ ID NO:9的核苷酸1-467(图5)，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸靶向肿瘤抑制基因多核苷酸的天然反义序列，例如SEQ ID NO:4、5、6、6a、6b、7、8或9的核苷酸以及它们的任何变体、等位基因、同系物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例为SEQ ID NO:10-30(图6-9)。

另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与肿瘤抑制基因多核苷酸的反义序列的反向互补序列具有至少50％的序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。

另一个实施方案提供了在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与肿瘤抑制基因反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50％的序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的肿瘤抑制基因多核苷酸的功能和/或表达。

在优选的实施方案中，组合物包含一种或多种结合至有义和/或反义肿瘤抑制基因多核苷酸的反义寡核苷酸。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种修饰的或置换的核苷酸。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种修饰的键。

在再一个实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的碱基，其包含硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、肽核酸、2’-O-甲基、氟代或碳、亚甲基或其它锁定核酸(LNA)分子。优选修饰的核苷酸是锁定核酸分子，包括α-L-LNA。